高效液相色譜法測(cè)定復(fù)明膠囊大黃酚含量研究

    復(fù)明膠囊系由中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)的《中藥成方制劑》第12冊(cè)收載的復(fù)明片改變劑型而成，其標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3一B一2385—97。復(fù)明膠囊由羚羊角、蒺藜、木賊、菊花、車前子、夏枯草、決明子、人參、山茱萸(制)、石斛、枸杞子、菟絲子、女貞子、石決明、黃連、谷精草、木通、熟地黃、山藥、澤瀉、茯苓、牡丹皮、地黃、檳榔二十四味藥組成，具有滋補(bǔ)肝腎，養(yǎng)陰生津，清肝明目的功效。復(fù)明膠囊用于青光眼，初、中期白內(nèi)障及肝腎陰虛引起的羞明畏光、視物模糊等病。 

    復(fù)明膠囊處方藥味較多，為保證制劑質(zhì)量，本文用高效液相色譜法對(duì)復(fù)明膠囊中所含的決明子活性成分大黃酚進(jìn)行含量測(cè)定，以期找到穩(wěn)定可靠含量測(cè)定方法。 

    儀器與試液：高效液相色譜儀：島津LC一10AD型高效液相色譜儀，SPD一10AVP型紫外檢測(cè)器，LC一10Atvp型泵，C18(5txm，250 mm×4．6 mm)色譜柱。大黃酚對(duì)照品(批號(hào)：110796—200311，含量測(cè)定用，購自中國藥品生物制品檢定所)。甲醇、乙腈為HPLC級(jí)試劑(美國TEDIA公司)；水為超純水；其余試劑為分析純(西安化學(xué)試劑廠)。復(fù)明膠囊由陜西康惠制藥有限公司提供。 

    實(shí)驗(yàn)方法：色譜條件用反相高效液相色法測(cè)定大黃酚含量的方法較為成熟，本標(biāo)準(zhǔn)參考有關(guān)文獻(xiàn)，經(jīng)試驗(yàn)后確定如下方法：色譜柱：c18柱(5 m，250 nlnl×4．6 lnln ID)；流動(dòng)相：乙腈一水一冰醋酸(70：30：1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為429 nm；柱溫為室溫；流速為1 mL／min；進(jìn)樣量：20 IxL。 

    測(cè)定波長的選擇精密稱定大黃酚對(duì)照品適量，加無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)制成每1 mL含12．5 g的溶液，以紫外分光光度法進(jìn)行掃描，測(cè)試波長范圍為350～500 nm，實(shí)際的測(cè)定結(jié)果：430 am波長處為最大吸收波長，故將測(cè)定波長定為429 nm。 

    供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，置水浴加熱回流提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，加10％鹽酸30 mL，置水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷，回收溶劑至干，殘?jiān)�加無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(0．45 m)取續(xù)濾液，即得。 

    陰性干擾試驗(yàn)按復(fù)明膠囊生產(chǎn)工藝制法制 24 h內(nèi)穩(wěn)定。備不含決明子的樣品，此樣品按上述供試品溶液制重復(fù)性試驗(yàn)按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同法制備陰性對(duì)照品溶液，照樣品測(cè)定法，精密吸取 一批樣品(批號(hào)070801)分別制備5份供試品溶液，10 L注入液相色譜儀，結(jié)果在與對(duì)照品色譜峰相 測(cè)定大黃酚的含量。結(jié)果表明，用此方法測(cè)定制劑同的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照無大 中大黃酚含量重復(fù)性良好。
黃酚的吸收峰，無干擾現(xiàn)象。 

    精密度試驗(yàn)精密吸取供試品溶液(批號(hào) 黃酚對(duì)照溶液5 mL、5 mL、5 mL、10 mL、10 mL、070801)，按擬定的色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次， 10 mL，分別置具塞錐形角瓶中，揮干溶劑，再分別大黃酚峰面積的RSD=0．98％。結(jié)果證明，精密度 加入已知大黃酚含量的制劑(批號(hào)070801)，按上述良好。 樣品制備方法和色譜條件制備加樣回收供試品溶穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試液(批號(hào)070801)分別在 液，并注入高效液相色譜儀，以下列公式計(jì)算回收0 h、4 h、8 h、12 h、24 h進(jìn)樣，結(jié)果表明供試品溶液在率，。 

    本品十批復(fù)明膠囊樣品，平均含量0．04568 ms／粒，0．04568×巧％ =0•0343 g／粒，所以將復(fù)明膠囊含量最低限度定為0．03 mS／粒。 

    實(shí)驗(yàn)研究采用甲醇為溶劑，加熱回流提取30，取續(xù)濾液一定量蒸干，加10％鹽酸置水浴中加熱水解1 h，再用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷，回收溶劑至于，殘?jiān)�加無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶解等處理樣品，能夠有效提取大黃酚，其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率等試驗(yàn)結(jié)果均良好，空白干擾試驗(yàn)無干擾，表明復(fù)明膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為完備，可控性強(qiáng)，含量專屬性強(qiáng)、靈敏度高。 

    根據(jù)大黃酚無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶液的紫外吸收特征，最大吸收波長430 nm，參考中國藥典，選定429 am為測(cè)定波長，能夠達(dá)到基線分離，并且分離度較好。 

    (本文節(jié)選自《復(fù)明膠囊中大黃酚的含量測(cè)定研究》)

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