干擾素預防尖銳濕疣激光治療后復發

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　　尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒引起的性傳播疾病（STD），發病率占我國STD的第三位［1］。尖銳濕疣傳染性強，復發率高，HPV與宮頸癌的發生密切相關，是目前STD研究重點之一。用干擾素治療尖銳濕疣，臨床報道較多。為探討干擾素局部注射對尖銳濕疣復發的預防作用，筆者運用原位雜交技術進行了對比觀察，現報告如下。

　　目的：采用臨床觀察和原位分子雜交技術，觀察干擾素α1b局部注射對尖銳濕疣激光治療后復發的預防作用。方法：試驗組用二氧化碳（CO2）激光聯合干擾素α1b局部注射治療尖銳濕疣，對照組單獨用CO2激光治療。結果：利用原位雜交法檢測兩組患者治療前后人乳頭瘤病毒-DNA（HPV-DNA），試驗組HPV-DNA陽性率為19.35%，復發率為16.13%，對照組則分別為56.67%和53.33%，兩組陽性率和復發率相比差異均具有非常顯著性（P＜0.001）。結論：干擾素α1b局部注射，可顯著降低激光技術后尖銳濕疣復發率及HPV-DNA檢出率。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料 所有病例均來自我院性病專科門診，凡伴有嚴重系統性疾病，其他病毒性疾病，6個月內用過免疫抑制劑者除外。尖銳濕疣患者61例，女46例，男15例。 年齡20~48歲，病程10~17天；初發48例，復發13例。所有患者均有婚外性交或配偶感染史。皮疹多為菜花狀、丘疹狀或扁平狀贅生物，分布男性冠狀溝、包皮和女性大小陰唇、陰道前庭等處。

　　1.2 主要試劑 HPV復位分子雜交試劑盒（In situ，DAKo公司出品，批號K602）。試劑盒含有下列試劑：生物素標記的廣譜HPV-DNA探針，該探針可檢測HN6、11、16、18、30、31、33、35、45、51及52共11個亞型的HPV-DNA；試劑盒提供HPV多型別檢測陽性及陰性對照探針；親合素-堿性磷酸酶；底物4-氯-3-吲哚酚磷酸鹽和四甲基偶氮唑鹽混合液（BCIP/NBT）。

　　1.3 方法 分組將61例患者隨機分成兩組：試驗組31例，對照組30例。在局麻下用剪刀剪除典型的皮損及治療后醋酸白上皮，醋酸白試驗非陽性者，取其陰性上皮。標本用中性福爾馬林固定，常規制片2份，1份做HE染色，另1份做原位雜交技術檢測。兩組治療結束后均隨訪3個月，觀察結果。

　　1.3.1 治療方法 試驗組先用CO2激光去除可見疣體，然后局部注射干擾素α1b（北京三元基因工程有限公司生產）；對照組單用CO2激光治療。具體方法：常規消毒患處，1%利多卡因局部浸潤麻醉。根據疣體大小調整CO2激光輸出功率，液化或碳化清除疣體。治療后外搽百多邦軟膏直至創面愈合。試驗組于CO2激光治療后在創面基底部注射干擾素α1b 30×105u，隔日1次共7次。

　　1.3.2 原位雜交方法 按試劑盒說明書程序進行，具體方法：石蠟切片4~6μm，脫蠟水化；0.01%蛋白酶（蘇州酶制品廠）消化，37℃ 10~15min；將探針深液滴加于切片上，95℃~100℃加熱變性5min；置37℃濕盒內雜交60min；置預熱48℃的洗脫液中30min；滴加堿性磷酸酶標記的鏈霉素，室溫20min BCIP/MBT顯色，核固紅復染，樹膠封片，光鏡觀察。試劑盒提供的HPV陽性及陰性對照探針均按以上步驟同步進行。

　　1.4 療效及雜交結果判斷 治愈：為患者經治療后皮損完全消退，且隨訪3個月無新皮疹出現。復發（未愈）：為經CO2激光完全去除疣體后，隨訪時再次出現新的皮疹。原位雜交陽性反應為表皮淺層細胞核內出現藍紫色至紫黑色顆粒。

　　2 結果

　　2.1 臨床療效 所有病例皮損均一次性清除，創面無感染，平均9天愈合，無瘢痕形成。兩組治療效果見表1。

　　表1 兩組治療尖銳濕疣療效比較 （略）

　　注：χ2=9.35，P＜0.001

　　2.2 試驗結果 所有陽性對照探針均呈陽性，陰性對照探針均呈陰性。在治療前61例尖銳濕疣標本中，均可見空泡細胞、棘層肥厚、角化不全等，治療后對照組原位雜交陽性率56.67%，試驗組陽性率19.35%。兩組治療前后原位雜交陽性率比較見表2。

　　表2 治療前后兩組原位雜交陽性率比較 （略）

　　注：χ2=9.04，P＜0.001

　　3 討論

　　國內治療尖銳濕疣的方法主要用激光、冷凍、電灼、微波、涂藥、手術切除，應用抗病毒藥物，均難以解決復發問題。干擾素具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節作用，國內外臨床給藥方法及干擾素種類不同，干擾素的最佳劑量和療程仍需進一步研究。

　　筆者應用原位雜交技術其敏感性均達90%以上［2］，檢測61例治療前尖銳濕疣標本，HPV-DNA陽性率為96.72%，同時對治療后所有患者醋酸白上皮進行了檢測，原位雜交陽顆粒主要見于棘細胞上皮層和角化不全的角質層細胞核內。試驗組和對照組臨床復發率分別為16.13%和53.33%，兩組治療后原位雜交陰性者均未復發。試驗組陽性率低，臨床復發率也低，這說明HPV檢出率高低決定臨床復發率的高低，也決定尖銳濕疣是否復發。

　　首先用CO2激光消除尖銳濕疣患者疣體及其周圍亞臨床感染病灶，能夠一次性清除皮損，比國外單獨用干擾素治療尖銳濕疣更有效，縮短療程，患者的依從性較好。與單獨用CO2激光治療相比，局部注射干擾素α1b可以抑制細胞內HPV的繁殖，同時增強了患者全身及局部的免疫功能，從而達到清除HPV，降低尖銳濕疣復發率的目的。

　　參考來源：《中華現代皮膚科學雜志》2005年第2卷第4期；《干擾素預防尖銳濕疣激光治療后復發臨床與觀察》；劉桂榮，張桂超，劉亞范

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