干姜提取物和四逆湯對心衰兔心臟舒縮性能的作用比較

　　本課題組在前期研究已證實，干姜提取物能使心衰兔LVSP、LV±dp/dt max 、LV+dp/dt max 、LV-dp/dt max 呈逐漸上升趨勢，t-dp/dt max 呈逐漸縮短趨勢，LVEDP呈下降趨勢，顯示其改善心肌收縮性能，減輕心衰癥狀的作用，并隨劑量增加而作用增強。由于四逆湯是回陽救逆的傳統(tǒng)名方，有研究證實其具有增加心衰大鼠心輸出量、增強心肌收縮力、較好維持心臟功能的作用，并能提高過氧化物歧化酶（SOD）活性、降低丙二醛（MAD）含量、抗氧化應(yīng)激、抑制心肌細胞凋亡，從而保護心肌細胞功能 ［1］ 。干姜是四逆湯的臣藥，在四逆湯的臨床療效中起著舉足輕重的作用。為了探討干姜在四逆湯中發(fā)揮的內(nèi)在作用，試從兩者改善心衰兔的心肌舒縮性能的作用異同開展研究。

　　1 材料與儀器

　　1.1 實驗動物 純種新西蘭兔（體重2.3kg±）40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，分別為低劑量干姜組、中劑量干姜組、高劑量干姜組和四逆湯組。由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號:省科學(xué)技術(shù)委員會2002A025，省醫(yī)學(xué)實驗動物管理委員會26-2003A004。

　　1.2 主要實驗試劑 （1）戊巴比妥鈉（由中國醫(yī)藥集團上海化學(xué)試劑公司提供，批號F20020915），用生理鹽水配備為3%和2%濃度備用。（2）肝素（由徐州萬邦生化制藥有限公司提供，批號0203107）用生理鹽水配備為125萬U/100ml和125萬U/250ml濃度備用。（3）5%葡萄糖（由廣東大冢制藥有限公司提供，批號030125）。（4）超臨界流體CO 2 萃取的干姜提取物（由廣州美晨藥業(yè)有限公司提供，批號200209054）。（5）食用花生油（由中山市鷹嘜食品有限公司提供，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號GB1534-86）。（6）受試品劑量計算、配制及觀察用量:按標(biāo)準(zhǔn)體重動物的等效劑量折算，兔口服干姜提取物的LD 50 為1.689ml/kg，分別取其1/60（0.028ml/kg）、1/30（0.056ml/kg）、1/15（0.112ml/kg）為低、中、高劑量。用食用花生油作溶劑，將干姜提取物稀釋100倍、50倍、25倍，分別配制成1%、2%、4%干姜提取物，配制后的觀察用量均為2.8ml/kg。（7）四逆湯的制備:藥物組成制附子、干姜、炙甘草，均購于廣東省中醫(yī)院藥劑科，并經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李薇教授鑒定，所購藥品均為正品。根據(jù)《中國藥典》2000版第一部 ［2］ 規(guī)定的比例，分別二次文火煎煮，煎液用水浴法蒸發(fā)濃縮為400ml，使其終濃度為0.5g生藥/ml，置4℃冰箱中冷藏備用。根據(jù)動物與人體表比換算 ［3］ ，兔口服四逆湯的等效劑量為生藥0.75g/kg，取10倍等效劑量7.5g/kg作為本實驗觀察用量，即四逆湯煎劑用量為15ml/kg。

　　1.3 主要儀器 （1）RM-600四道生理儀（日產(chǎn)光電）;（2）江灣I型微型人工呼吸機（第二軍醫(yī)大學(xué)生產(chǎn)）;（3）恒速輸液泵（2132microperpex peristaltic）;（4）心導(dǎo)管、輸液管（江蘇無錫市錫山 南泉高分子醫(yī)械廠出產(chǎn)）;（5）常規(guī)手術(shù)器械。

　　2 實驗方法

　　2.1 手術(shù)方法 ［4～6］ （1）用3%戊巴比妥鈉對新西蘭兔行左側(cè)耳緣靜脈注射麻醉，仰臥固定;（2）分離氣管及左側(cè)頸總動脈后，切開左側(cè)頸總動脈，插入直徑1mm已充滿肝素（濃度125萬U/250ml）的心導(dǎo)管，心導(dǎo)管經(jīng)壓力換能器連接四道生理儀，緩緩?fù)七M同時觀察示波器，當(dāng)波型提示導(dǎo)管已進入左心室時停止推進;（3）氣管切開，連接微型人工呼吸機，潮氣量380ml左右，呼吸頻率40次/min左右，并根據(jù)動物體重等個體情況調(diào)節(jié)呼吸頻率和潮氣量。

　　2.2 造模方法 上述手術(shù)完畢后，經(jīng)右側(cè)耳緣靜脈留置的輸液管，注入肝素注射液1ml/kg（濃度125萬U/100ml），然后持續(xù)滴注5%葡萄糖（滴速20滴/min）;穩(wěn)定10min后，記錄各項指標(biāo)的造模前基礎(chǔ)值;用輸液泵經(jīng)上述留置的輸液管，恒速輸入2%戊巴比妥鈉，先以0.15ml·kg -1 ·min -1 的滴速，密切觀察各指標(biāo)的變化，當(dāng)LV±dp/dt max 下降到基礎(chǔ)值的20%左右，暫停滴入，穩(wěn)定觀察10min，觀察過程若出現(xiàn) LV±dp/dt max 回升者，再以0.1ml·kg -1 ·min -1 恒速給予維持量。

　　2.3 給藥途徑及用量 經(jīng)口插管入胃，于造模成功并穩(wěn)定維持10min后，灌服受試品或?qū)φ掌罚�并用適量蒸溜水沖管。各組用藥量如下:低劑量干姜組:1%干姜提取物2.8ml/kg;中劑量干姜組:2%干姜提取物2.8ml/kg;高劑量干姜組:4%干姜提取物2.8ml/kg;四逆湯組:四逆湯煎液15ml/kg。

　　2.4 指標(biāo)的觀察

　　2.4.1 觀察方法 ［4，5］ 四道生理儀定標(biāo)靈敏度400mmHg/mm，紙速50mm/s，經(jīng)連接股動脈的壓力換能器測量SAP和DAP;經(jīng)載波放大器記錄左心室內(nèi)壓峰值（LVSP），將左室內(nèi)壓信號經(jīng)直流放大器放大10倍，測定左室舒張末期壓（LVEDP），將載波放大器的電訊號輸入微分器，測量左心室內(nèi)壓變化速率最大值（LV±dp/dt max ）;測定心率（HR）并描記變化曲線;記錄II導(dǎo)ECG，根據(jù)心電R波峰判斷心室開始收縮的標(biāo)志至dp/dt max 的間隔時間（t-dp/dt max ）;從血壓收縮波起始點至舒張波起點測量心室射血時間（LVET） ［7］ 。

　　2.4.2 觀察指標(biāo) 造模前記錄基礎(chǔ)值，造模成功并穩(wěn)定10min后記錄藥前值，給藥后分別記錄藥后5min、10min、15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min、150min以下各指標(biāo)。（1）左心室內(nèi)壓峰值（LVSP）;（2）左室舒張末期壓（LVEDP）;（3）左心室內(nèi)壓變化速率最大值（LV±dp/dt max ）;（4）左心室內(nèi)壓上升速率最大值（LV+dp/dt max ）;（5）左心室內(nèi)壓下降速率最大值（LV-dp/dt max ）;（6）Ⅱ?qū)�ECG，根據(jù)心電R波峰判斷心室開始收縮的標(biāo)志至dp/dt max 的間隔時間（t-dp/dt max ）;（7）心室射血時間（LVET）:從血壓收縮波起始點至舒張波起點的間隔時間。

　　3 數(shù)據(jù)處理

　　使用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析:（1）各組自身比較:各組藥前后自身比較采用配對t檢驗。（2）組間比較:以［（各時點實測值-藥前值）/藥前值×100%］計算各指標(biāo)的變化率。采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），方差齊性者選擇最小顯著差異法檢驗（LSD檢驗）;方差不齊者選擇Dunnett t 3 法進行檢驗。

　　4 實驗結(jié)果

　　結(jié)果見表1、表2、表3。結(jié)果表明，干姜提取物和四逆湯對心衰兔心肌舒縮性能的共同作用表現(xiàn)在幾方面:（1）使心衰動物模型的LVSP、LV±dp/dt max 、LV+dp/dt max 均呈逐漸上升趨勢，同時使t-dp/dt max和LVET呈逐漸縮短趨勢，顯示其增強心肌收縮性能的作用;（2）使心衰動物模型的LV±dp/dt max 、LV-dp/dt max 呈逐漸上升趨勢，顯示增強心肌舒張性能的作用;（3）使心衰動物模型的t-dp/dt max 呈逐漸縮短趨勢，顯示其降低外周阻力，減輕心臟后負荷的作用。通過以上幾方面的綜合作用，改善心衰兔的心臟功能，但其作用程度存在一定的差異。

　　干姜提取物和四逆湯對心衰兔心肌舒縮性能的作用差異表現(xiàn)在幾方面:（1）四逆湯組與各劑量干姜組的t-dp/dt max 和LVET的變化率組間差異無顯著性;（2）就LVSP而言，四逆湯組藥后120min時與高劑量干姜組之間，藥后150min時與中劑量干姜組之間，差異有顯著性或差異有非常顯著性，P<0.05或P<0.01;（3）就LV±dp/dt max 而言，四逆湯組與高劑量干姜組在藥后30～150min各時點均有差異，45min、60min、150min差異有非常顯著性，P<0.01，90～120min差異有非常顯著性，P<0.001;（4）就LV+dp/dt max 而言，四逆湯組與高劑量干姜組在藥后90～150min各時點差異均有顯著性，P<0.05;（5）就LV-dp/dt max 而言，四逆湯組與中劑量干姜組在藥后30～150min各時點差異均有顯著性，90min時差異有非常顯著性，P<0.01，與高劑量干姜組在藥后30～150min各時點均有差異，30min和150min時 差異有非常顯著性，P<0.01，45～120min各時點差異有非常顯著性，P<0.001。（6）四逆湯組藥后各時點LVEDP與藥前值比較均未見差異，而各劑量干姜組藥后各時點LVEDP呈下降趨勢，尤以高劑量組下降趨勢明顯，在藥后10～150min各時點，與藥前值比較差異有非常顯著性，P<0.001。

　　5 結(jié)論

　　（1）中、高劑量干姜組，尤其是高劑量干姜組提高LVSP、LV±dp/dt max 、LV+dp/dt max 和LV-dp/dt max 的幅度明顯比四逆湯組大，具有較強的增強心肌收縮和舒張性能的作用。（2）高劑量干姜組在降低LVEDP有獨特優(yōu)勢，能減輕心臟前負荷，改善室壁張力和舒張末期容積，增強心肌舒張性能。

　　6 討論

　　干姜是四逆湯的臣藥，在四逆湯的臨床療效中起著舉足輕重的作用，四逆湯中單用附子，強心作用既不明顯，也不持久，且毒性很大;若與干姜、甘草配伍，即強心、升壓作用顯著而持久。歷代均有“附子無干姜不熱，得甘草則緩”的說法。本實驗研究的結(jié)果提示四逆湯和干姜提取物均具有增強心衰兔心臟功能的作用，共同表現(xiàn)為增強心肌收縮和舒張性能、降低外周阻力、減輕心臟后負荷，而以干姜提取物的作用更強，差異具有非常顯著性。同時干姜提取物還在改善心率、降低舒張末期壓具有優(yōu)勢，更有利于冠脈灌流，減輕心臟前負荷，改善室壁張力和舒張末期容積，增強心肌舒張性能。

　　由于四逆湯中的附子毒性較大，有研究表明，熟附片煎劑灌胃，可引起兔心率變慢、傳導(dǎo)阻滯、室性期外收縮、室性心動過速，最后死于心室顫動，并可見呼吸困難、瞳孔縮小、 分泌物增多、大小便增多，一般于2～3h內(nèi)死亡 ［8］ 。雖然通過配伍干姜和甘草，能使毒性明顯減輕，但如果長期服用，難免有毒性積蓄的弊端。探討傳統(tǒng)古方的有效成分，在保留原方基本功效的前提下，簡化藥物組成，開發(fā)藥物新劑型，可能是中藥現(xiàn)代化的發(fā)展方向。干姜在四逆湯所發(fā)揮的內(nèi)在作用是什么?其有效成分是否是四逆湯心血管藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一?單用干姜和使用四逆湯復(fù)方各有什么優(yōu)勢和弊端?值得進一步深入研究。（參考來源：干姜提取物和四逆湯對心衰兔心臟舒縮性能的作用比較，盧傳堅，中華中西醫(yī)雜志2004年第5卷第14期）

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