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                    金克專題 >> 金克槐耳顆粒對胃癌細(xì)胞的抑制作用
    
                
                
    
                    金克槐耳顆粒對胃癌細(xì)胞的抑制作用
    
                
    
                    
    來源： 百濟(jì)新特藥房網(wǎng)          發(fā)布時間：2011-6-2 17:56:28
    
                
    
                
    
                
                
    
                    
    
                    
    
                    
    
                        
    
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                          金克槐耳顆粒是國家一類新藥，是一種重要的抗癌中藥，目前已運(yùn)用于臨床，對肝癌、肺癌、食管癌、胃癌等均有獨(dú)特療效。已有實(shí)驗(yàn)表明槐耳清膏能誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞A549凋亡。但其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬探討金克是否能誘導(dǎo)胃癌腫瘤細(xì)胞凋亡，通過 MTT法，Sub—G1分析金克誘導(dǎo)抑制細(xì)胞的能力，以闡明其在胃癌化療中的藥用價值。 
    

    
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MTT法檢測1．5 g／L金克作用36 h達(dá)到最佳抑制32．56％，同時，在該藥物濃度，時間Sub—G1法檢測金克誘導(dǎo)MKN- 28細(xì)胞凋亡率33． 46％，均高于30％。金克對誘導(dǎo)MKN．28細(xì)胞的凋亡作用介于低度和中度敏感。 
    

    
    研究討論，四唑鹽快速比色法( MTT法) 是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。1 9 8 3年Mo s sman根據(jù)細(xì)胞能量代謝水平與DNA合成水平相平行的原理，建立了四唑鹽比色法。由于活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶能脫下琥珀酸氫原子，使其氧化成延胡索酸。而MTT作為脫下氫原子的接受劑被還原成藍(lán)紫色的甲簪，反應(yīng)產(chǎn)物甲簪顏色與活細(xì)胞成正比。凡具有代謝活性的細(xì)胞無論處于靜止期還是分裂期，都有還原MTT的作用，而死細(xì)胞和紅細(xì)胞則沒有這種能力。利用此原理測定抗腫瘤藥物作用于腫瘤細(xì)胞的變化并計算出藥物對腫瘤細(xì)胞的抑制率。 
    

    
    自MTT法應(yīng)用于抗腫瘤藥物敏感性實(shí)驗(yàn)以來其以簡單、快速、敏感性好等優(yōu)點(diǎn)而被臨床和科研廣泛應(yīng)用。但作為一種新的方法仍存在一些問題，如( 1 )三個平行孔之間的吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)差平均值為0．08，對腫瘤細(xì)胞抑制率越高則吸光度值越低，同樣誤差情況下，結(jié)果產(chǎn)生的差異相對越大，所獲結(jié)果就會高于實(shí)際敏感性結(jié)果。( 2 ) 某些有色藥物易影響酶標(biāo)儀的檢測結(jié)果造成假陰性。( 3 ) 反應(yīng)產(chǎn)物甲簪的溶解劑的不穩(wěn)定性也會影響結(jié)果的精確度。( 4 ) 研究人員發(fā)現(xiàn)絲裂霉素作用 3天后的死細(xì)胞中仍保留了活細(xì)胞 2 4 ％的琥珀酸脫氫酶活性，使甲簪產(chǎn)量偏高，這也會影響MTT法的靈敏度。本實(shí)驗(yàn)中使用的藥物金克為有色藥物，在實(shí)驗(yàn)過程中使用孔板離心機(jī)去上清的方法除去有色液體，重懸細(xì)胞排除藥物顏色對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為精確。 
    

    
    細(xì)胞凋亡( apoptosis，Ap) 是不同于壞死( necro- sis )的一種自主的程序性自殺性死亡( progra mmed celldeath，PCD)。在細(xì)胞凋亡晚期，細(xì)胞內(nèi)核酸內(nèi)切酶激活，并在核小體間切割D N A鏈，使 D N A降解為以核小體(200bp)為單位的片段。細(xì)胞被固定后，小分子D N A片段由胞內(nèi)滲出，細(xì)胞內(nèi)DNA含量明顯降低，在G1期峰前以Sub．G1峰的形式出現(xiàn)而被識別 曲。由此原理建立的Sub．G1法因其操作簡便快捷且費(fèi)用低而得到廣泛應(yīng)用。但對于早期凋亡細(xì)胞而言，斷裂的DNA片段較少或片段較大，DNA因而滲出較少，故應(yīng)用Sub-G1法無法檢測到早期凋亡細(xì)胞，且其不能準(zhǔn)確地分析細(xì)胞凋亡的周期時相性。因此，Sub-G1法的應(yīng)用具有一定的局限性。 
    

    
    Nakazato 等將根治性切除胃癌病例 ( n=262例)，術(shù)后隨機(jī)分為單純化療組( MMC+5-FU)和免疫化療組( MMC+5-F U+槐耳顆粒) 進(jìn)行試驗(yàn)，所有病例隨診5年以上，發(fā)現(xiàn)免疫化療組的5年無病生存率 7 0．7 ％，而單純化療組僅為59．4％，兩組之間差異有顯著性( P<0．0 1 )。總之，MTT法和Sub-G1法是兩種快捷、有效檢測藥物作用的方法，同時金克能直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，提高機(jī)體的免疫力，對機(jī)體無毒副作用，對中晚期腫瘤患者能明顯改善存活率。金克對于胃癌細(xì)胞的抑制作用介于低度敏感和不敏感之間，但是能增強(qiáng)免疫，無明顯毒副作用，具有極大的臨床應(yīng)用前景。 
    
    
                     
                    
    
                        
                    
    
                    
    
    
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