慢性胃炎、消化性潰瘍患者幽門螺旋桿菌的分離鑒定和耐藥性分析

　　幽門螺桿菌（helicobacter pylori，Hp）感染是人類最常見的慢性感染之一，估計(jì)全球Hp感染人數(shù)超過50%［1］。Hp是一種定植于人胃黏膜并引起多種胃、十二指腸疾病的革蘭陰性細(xì)菌。Hp的致病因素包括內(nèi)毒素、空泡毒素、粘附素和Cag毒力島編碼的一些基因產(chǎn)物［2，3］。Hp感染是慢性胃炎及消化性潰瘍的主要原因，在慢性活動(dòng)性胃炎患者活檢標(biāo)本中Hp檢出率達(dá)90%［4］，在消化性潰瘍患者活檢標(biāo)本中Hp檢出率可達(dá)100%［5］。因此，慢性胃炎患者胃黏膜標(biāo)本中Hp的檢查，對(duì)Hp感染進(jìn)行根治性治療、徹底治愈胃炎和消化性潰瘍有著重要的臨床意義。

　　1 資料與方法

　　1.1 病例的選擇 胃組織標(biāo)本來自2003年2月～2004年8月在吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院消化內(nèi)科就診，經(jīng)胃鏡活檢快速尿素酶試驗(yàn)陽性的195例慢性胃病患者。在留取標(biāo)本的當(dāng)天采取外周血分別檢測(cè)Hp-IgG抗體和Hp-CagA抗體。所有患者在胃鏡檢查前30天內(nèi)未服用鉍制劑、質(zhì)子泵制劑、抗菌藥及甾體類抗炎藥物，亦無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患。

　　1.2 血清Hp-IgG抗體及Hp-CagA抗體的檢測(cè) 空腹靜脈血3ml，常溫下分離血清-20℃保存。采用ELISA法檢測(cè)Hp-IgG抗體及Hp-CagA抗體。試劑盒由上海生物工程公司提供。

　　1.3 Hp的分離培養(yǎng)鑒定 胃竇部及胃體部組織標(biāo)本證實(shí)尿素酶陽性的前提下，胃竇部距幽門2～3cm處胃體小彎處分別鉗取黏膜組織，置無菌生理鹽水中4℃保存，在4h內(nèi)接種SKirrow S選擇性培養(yǎng)基中，置厭氧罐內(nèi)，緩慢注入混合氣體（5%O2、10%CO2、85%N2），37℃培養(yǎng)連續(xù)5天觀察結(jié)果。Hp的鑒定依據(jù)主要包括：革蘭染色陰性，外觀呈S或弧形，生化反應(yīng)結(jié)果為尿素酶試驗(yàn)陽性、觸酶試驗(yàn)陽性和氧化酶試驗(yàn)陽性。

　　1.4 最低抑菌濃度的測(cè)定 采用平皿二倍稀釋法檢測(cè)接種細(xì)菌對(duì)抗生素的最低抑菌濃度。具體方法和藥敏判斷按NCCLS2000年的規(guī)定。標(biāo)準(zhǔn)菌株：幽門螺桿菌NCTC11637（CagA陽性）作為質(zhì)控菌株�？股�素：甲硝唑、替硝唑、克拉霉素、阿莫西林、紅霉素、呋喃唑酮、四環(huán)素。

　　2 結(jié)果

　　2.1 不同慢性胃病患者幽門螺桿菌分離鑒定結(jié)果 在不同類型的慢性胃病患者的胃黏膜標(biāo)本中Hp的分離培養(yǎng)呈現(xiàn)較高的陽性率，且不同慢性胃病患者Hp的陽性率差異無顯著性（P＞0.05），見表1。表1 不同慢性胃病患者Hp分離培養(yǎng)結(jié)果

　　2.2 不同慢性胃病患者血清Hp-IgG抗體與Hp培養(yǎng)陽性率的關(guān)系 在195例慢性胃病患者中，165例呈現(xiàn)Hp-IgG抗體陽性。其Hp的陽性率達(dá)88.0%。而Hp-IgG抗體陰性患者，其Hp的陽性率僅為33.3%，兩者差異有顯著性（P＜0.01），見表2。表2 血清Hp-IgG抗體與Hp培養(yǎng)陽性率的關(guān)系

　　2.3 不同慢性胃病患者血清Hp-CagA抗體與Hp培養(yǎng)陽性率的關(guān)系 在195例慢性胃病患者中，血清Hp-CagA抗體陽性為125例，其Hp的陽性率為84.4%。而Hp-CagA抗體陰性患者，其Hp的陽性率為62.5%。見表3。 表3 血清Hp-CagA抗體與Hp培養(yǎng)陽性率的關(guān)系

　　2.4 195株Hp分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果 阿莫西林、克拉霉素、四環(huán)素及呋喃唑酮對(duì)Hp顯示了較強(qiáng)的抗菌活性，紅霉素較次之，甲硝唑及替硝唑?qū)�Hp的敏感性較低。見表4。表4 7種抗生素對(duì)195株Hp的藥敏結(jié)果

　　3 討論

　　Hp是革蘭染色陰性的微需氧細(xì)菌，是慢性胃炎及消化性潰瘍的主要病因。該項(xiàng)研究對(duì)195例快速尿素酶試驗(yàn)陽性的慢性胃病患者進(jìn)行了分離培養(yǎng)，結(jié)果符合Hp判定標(biāo)準(zhǔn)的菌株共155株，陽性率達(dá)到79.5%。這與歐美等發(fā)達(dá)國家在90%以上的培養(yǎng)陽性率相比還有一定的差距，分析原因可能是在技術(shù)及方法的成熟方面相對(duì)比較落后。在比較不同胃病Hp培養(yǎng)陽性率發(fā)現(xiàn)，各種類型的慢性胃病之間無明顯差異。說明Hp是引起慢性胃病不可忽視的重要因素。

　　目前應(yīng)用于Hp診斷方法有很多種。我國1999年制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)分為科研診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)�？蒲性\斷標(biāo)準(zhǔn)要求形態(tài)學(xué)、尿素酶依賴性試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)及特異性PCR四項(xiàng)中的任意兩項(xiàng)或Hp培養(yǎng)陽性即可確診。該項(xiàng)工作采用了Hp分離培養(yǎng)和血清學(xué)檢測(cè)。結(jié)果表明，在Hp培養(yǎng)陽性的基礎(chǔ)上，Hp-IgG抗體和Hp-CagA抗體都呈現(xiàn)了較高的陽性率，但單純一項(xiàng)的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果仍有陰性結(jié)果。分析原因一方面不能排除患者由于免疫力較低的因素，不能有效地產(chǎn)生抗體，另一方面也不能排除技術(shù)操作方面的偏差。因此，筆者認(rèn)為在分離培養(yǎng)Hp的基礎(chǔ)上，結(jié)合這兩種血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，以提高診斷的正確性。

　　隨著抗生素在Hp根除治療中的應(yīng)用，Hp的耐藥株也有陸續(xù)的報(bào)道，直接影響了Hp的根除效果，也是導(dǎo)致抗感染失敗的重要原因。由于抗生素在體內(nèi)易受胃內(nèi)pH影響而失去活性，硝基咪唑類藥物在胃內(nèi)不受pH影響，已經(jīng)成為治療Hp感染的重要藥物。阿莫西林及克拉霉素在胃內(nèi)受pH影響較少，是根除Hp感染的重要藥物，對(duì)195株Hp進(jìn)行藥敏分析發(fā)現(xiàn)，甲硝唑的MIC50已超過125μg/ml，說明敏感性很差，替硝唑的MIC50也已達(dá)到64μg/ml，敏感性亦不理想。這與國內(nèi)的相關(guān)報(bào)道一致。克拉霉素是目前抗生素中對(duì)幽門螺桿菌作用最強(qiáng)的藥物之一，該藥敏試驗(yàn)也說明在分離的95株Hp中，克拉霉素是Hp感染根除治療的首選藥物。盡管四環(huán)素和呋喃唑酮目前在臨床已經(jīng)很少應(yīng)用，但藥敏結(jié)果提示可以作為根除Hp感染的輔助療法。（參考來源：慢性胃炎、消化性潰瘍患者幽門螺旋桿菌的分離鑒定和耐藥性分析，張學(xué)英，中華醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志2006年第5卷第7期）

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