新生鼠提取液對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響及其抗氧化作用研究

　　隨著生物化學的發展，生化藥物已經成為臨床治療上不可缺少的藥物之一。由新生大鼠提取物、山楂及荷葉等組成的降脂抗栓丸，作為治療高血脂及動脈硬化的院內制劑，在臨床上取得良好的療效。為進一步開發利用院內制劑，本文對降脂抗栓丸的主要成分—新生大鼠提取液（Newborn rat extract，NRE）進行了活性成分測定，并通過實驗性高脂血癥模型，觀察其對血脂代謝的影響，現報道如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 動物及試劑 Wistar大鼠，雄性，體重208±13g，合格證號:醫動字第10-5112，由白求恩醫科大學實驗動物部提供。甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

　　1.2 NRE制備 將正常分娩后1天內的新生Wistar大鼠剪碎，按1:1（w/v）比例加生理鹽水制成勻漿，電動攪拌將細胞打碎，以3000rpm離心20min，取上清液部分，置低溫（-40℃）保存。

　　1.3 NRE活性物質測定 按照放免藥盒的測定方法，測定NRE中雌二醇（E2）、促黃體生成素（LH）、促濾泡成熟素（FSH）、垂體泌乳素（PRL）、孕酮（P）、睪酮（T）、生長激素（GH）及心鈉素（ANP）含量。

　　1.4 高脂模型制備［1］ 高脂飲食組在給藥前一天開始，每晚6:00～7:00給予高脂飼料（配方:2%膽固醇、0.2%甲基硫氧嘧啶、0.3%膽酸鈉、7.5%豬油、90%普通飼料），每只鼠平均20g，白天補充普通飼料，共12天。

　　1.5 方法 取Wistar大鼠72只，隨機分為6組，每組12只。正常對照組:喂普通飼料，給生理鹽水2ml/kg;模型對照組:喂高脂飼料，給生理鹽水2ml/kg;陽性對照組:喂高脂飼料，給非諾貝特200mg/kg;NRE小、中、大劑量組:喂高脂飼料，分別給NRE1.0、2.0、4.0ml/kg。各組均于上午9:00～10:00灌胃給藥1次，連續12天。于給藥最后1天晚間禁食，不禁水，次日上午，將動物用3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，自腹主動脈采血，分離血清，按試劑盒說明書方法測定TG、TC、LDL-c、HDL-c、MDA及SOD。取1/2肝臟置10%甲醛液中固定以行脂肪染色，觀察脂肪沉積情況。另1/2肝臟待測MAD及SOD。

　　2 結果

　　2.1 NRE活性物質測定 以8種放免藥盒測定NRE中活性物質含量，結果E2（ng/ml）為35.10±31.22，ANP（ng/ml）為0.37±0.35，GH（ng/ml）為6.804.11，LH（mIU/ml）為0.49±0.05，h-PRL（mU/ml）為5.79±4.41，FSH（mIU/ml）為0.73±1.79，T（pmol/管）為1.27±0.72，P（pmol/ml）為3.83±1.10，表明NRE中含有多種性激素類物質及肽類物質，以E2、GH、ANP的含量較高。

　　2.2 NRE對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響 與正常對照組比較，高脂對照組血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c均顯著升高（P<0.05或P<0.001），而HDL-c則顯著下降（P<0.01），表明高脂模型復制成功。 與高脂對照組比較，NRE2.0、4.0ml/kg組均能明顯降低血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c（P<0.05～P<0.01），并明顯升高血清HDL-c（P<0.01），其作用效果與陽性對照藥非諾貝特200mg/kg相當。NRE1.0ml/kg組對上述指標均無明顯影響，見表1。

　　表1 NRE對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響（x±s，mmol/L）(略) 注:與正常對照組比較， △ P<0.05， △△ P<0.01; △△△ P<0.001;與高脂對照組比較， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001。

　　2.3 NRE對高脂血癥大鼠血清及肝臟MAD及SOD的影響 與正常對照組比較，高脂對照組血清及肝臟MDA含量均明顯升高（P<0.01），而SOD活性明顯降低（P<0.05），表明高脂血癥大鼠體內伴有自由基脂質過氧化損傷及抗氧化 酶活性降低。NRE1.0、2.0、4.0ml/kg劑量組均能使高脂血癥大鼠血清及肝臟MDA含量明顯降低，SOD活性明顯升高（P<0.05或P<0.01），見表2。

　　表2 NRE對高脂血癥大鼠MDA及SOD的影響 （x±s，n=10）(略) 注:與正常對照組比較， △ P<0.05， △△ P<0.01;與高脂對照組比較 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。

　　2.4 NRE對高脂血癥大鼠肝組織脂肪沉積的影響 各組織肝臟標本固定切片后行脂肪染色，觀察肝組織脂肪沉積情況。結果表明，正常對照組10只大鼠肝細胞均未見脂肪變性（0/10），高脂對照組10只大鼠肝細胞均可見脂肪變性（10/10），NRE1.0、2.0、4.0ml/kg組大鼠肝細胞脂肪變性分別為6/10、4/10、3/10，且脂肪空泡明顯減少。經χ2檢驗，NRE2.0、4.0ml/kg組與高脂對照組比較差異有顯著性（P<0.05或P<0.01），表明NRE可抑制高脂血癥大鼠肝臟脂肪的沉積。

　　3 討論

　　動脈粥樣硬化（AS）是缺血性心、腦血管病的主要病理基礎。而脂質代謝異常是AS形成的重要因素。現已知血清TC、TG和LDL水平與AS形成呈正相關;HDL水平與AS形成呈負相關［2，3］。本實驗結果表明，NRE能使高脂血癥大鼠的TC、TG、HDL-c明顯

　　降低，并升高HDL-c含量，說明其可能通過增加高脂血癥大鼠外周組織細胞中的膽固醇向肝臟轉運過程，以減少膽固醇在外周組織細胞中的聚集和對血管內皮細胞的廣泛性損害，防治AS形成。

　　近年來自由基脂質過氧化損傷與AS發病的關系，已引起人們極大關注。實驗性AS早期，MDA就明顯增加，它可損傷內皮細胞膜，造成膜流動性減弱，減少PGI2的合成。MDA增高，使LDL發生氧化修飾，利用吞噬細胞吞噬，形成泡沫細胞，促進白細胞和血小板在動脈內膜的粘附和聚集，最終導致平滑肌細胞移植和脂質沉著，形成AS病變［4］。本實驗結果表明，給高脂血癥大鼠灌胃NRE后，血清及肝組織LPO含量均明顯下降，而SOD活性明顯增高，表明其可通過抑制脂質過氧化物的產生及提高自身的抗氧化酶活性發揮抗AS作用。

　　NRE中含有雌激素、心鈉素及其它激素類物質，是否參與高脂血癥損傷的保護作用有待于進一步探討。（參考來源：新生鼠提取液對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響及其抗氧化作用研究，陳滿秋，中華現代中西醫雜志2004年第2卷第7期）

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