無精子因子微缺失與男性不育的臨床研究

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【摘要】目的 探討無精子因子(AZF)微缺失與男性不育癥之間的關系。方法 隨機檢測來筆者所在醫院就診男性不育患者51例及20例正常生育史男性的AZF基因，并要求先了解相關精液特征，根據精液特征將患者分為無精子癥30例、嚴重少精子癥及少精子癥21例兩組；分別比較兩個實驗組與對照組AZF基因微缺失檢出率。結果 51例不育男性中檢測出Y染色體AZF微缺失7例，其中30例無精子癥組檢測出Y染色體AZF微缺失5例，21例嚴重少精子癥及少精子癥組檢測出Y染色體AZF微缺失2例。正常對照組均未見Y染色體AZF微缺失。結論AZF微缺失的檢測對原發性男性不育具有重要的臨床指導意義，值得臨床推廣應用。

【關鍵詞】男性不育；無精子因子

根據有關統計學資料，在我國正常家庭，不孕不育問題中有40%左右系男方問題。筆者通過對51例男性不育患者進行無精子因子(AZF)檢測，探討排除合并其他男性疾病后，原發性無精及少弱精癥患者與AZF微缺失的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取2010年11月~2012年4月來筆者所在醫院就診的男性不育患者51例，年齡24~39歲，平均(29.5±6.3)歲。其中精液經離心沉淀后，連續2次顯微鏡檢查常規精液均未發現精子者(無精子癥)30例；連續兩次常規精液分析精子密度均＜5×10⁶/mL或a級＜5%(嚴重少精子癥)及連續2次常規精液分析精子密度均為＜20×10⁶/mL(少精子癥)者21例，分別分為無精子癥組和嚴重少精子癥及少精子癥組。并排除合并其他男科疾病。另選擇20例正常生育史男性健康志愿者作為對照組，年齡26~37歲，平均(30.7±4.4)歲。兩組患者在性別、年齡等一般資料比較(P＞0.05)，差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 AZF檢測方法

抽取受試者外周血3 mL，EDTA-K2抗凝后嚴格按照DNA提取試劑盒(HQ&Q Blood DNA Kit，安徽優晶生物工程有限公司)說明提取DNA。再進行多重PCR擴增，以性別決定基因SRY作為內參照，每個AZF區域設置2個序列標簽位點(sequence tagged sites，STS)，AZFa為SY84、SY86；AZFb為SY127、SY134；AZFc為SY254、SY255。所有DNA樣品均經2次多重PCR完成，稱為Multiplex A和B，每次多重PCR均包括AZFa、b、e區域的STS和對照基因引物。在Multiplex A中完成SRY、SY254、SY127、SY86的擴增；在Multiplex B完成SRY、SY134、SY84、SY255的擴增。PCR擴增產物經3.0%瓊脂糖凝膠電泳(恒壓130 V)40 min，用GEL Doc2000凝膠成像系統進行DNA電泳條帶的觀察。

1.3 統計學處理

采用統計學軟件SPSS 13.0進行統計學分析，計量資料用(x(-)±s)的形式表示，采用t檢驗，計數資料用χ²檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組與AZF微缺失概況比較

51例不育患者中AZF基因微缺失7例，無精子癥組有2例AZFa缺失，1例AZFa+AZFb+AZFc缺失，1例AZFb+AZFc缺失，1例AZFb缺失；嚴重少精子癥及少精子癥組有2例AZFc缺失。總體AZF微缺失檢出率13.7%。

2.2 AZF基因微缺失與精子密度的關系

30例無精子癥患者中Y染色體AZF微缺失5例，在無精子癥患者中AZF微缺失檢出率16.7%；21例嚴重少精子癥及少精子癥患者中AZF微缺失2例，檢出率9.5%，對照組未檢出AZF微缺失。統計學分析顯示各組間AZF微缺失率，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

3 討論

據有關研究表明，有多種原因均可引起男性生精障礙，其中有近30%的患者原因不明，即排除其他男性疾病后引起的生精障礙，稱為原發性不育，其中10%~15%的無精子癥和5%~10%的嚴重少精子癥及少精子癥由Y染色體上AZF的微缺失造成。

目前AZF微缺失的篩選在我國尚處于新興階段，對嚴重少弱精子癥和無精子癥的臨床指導意義卻難以估量，具體表現為：(1)通過檢查可以明確“原因不明”的不育患者的病因，減少無謂的“治療”，以達到節約醫療資源及患者治療少花費的目的，有利于社會和個人；(2)如果該類患者想以輔助生育技術達到生育目的，那么有必要對患者告知的是，其后代也存在著不育的可能，具體說來，即對于Y染色體上的AZF微缺失，可以很大程度上從父代傳給子代，最有可能的后果是致使子代不育。一般說來，傳統診斷手段中Y染色體培養過于耗時，并且不能區分具體位點的缺失，不利于臨床治療和診斷。所以筆者運用多重PCR技術檢測Y染色體AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc3個區域中6個序列標簽位點微缺失。本技術簡便、快速，較之傳統診斷方法節約時間，對患者損傷小。還可以避免因誤診帶來的不必要的藥物及手術治療，為男性不育患者的診斷、治療節省相當大的費用且可以提供有力的科學依據，值得臨床推廣應用。

(張文林，鄧江錦，無精子因子微缺失與男性不育的臨床研究[J]中國醫藥科學2012年7月第2卷第14期：234、236)

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