聚合酶鏈反應技術診斷淋病的體會

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2009年1月至2011年1月，我科采用聚合酶鏈反應技術(PCR)檢測淋病標本1568份，現將檢測結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 本組泌尿生殖器分泌物采集標本共1568例，均來自于我院泌尿外科和婦科門診病例。其中男性標本656例，女性標本912例。年齡18~60歲，其中18~30歲526例(33.55%)；31~40歲437例(27.87%)，41~50歲386例(24.62%)。51歲以上者219例(13.97%)。本組均為有淋病癥狀的疑似病人。職業類別：從事休閑服務業如美容美體業、發廊、男士或女士會所、酒店、賓館、足浴、按摩房、洗頭房等從業人員625例(39.86%)。進城務工人員585例(37.31%)，個體商戶、企業老板、經理類人員148例(9.44%)，流動人口無固定職業人員178例(11.35%)，公職干部、職員類人員32例(2.04%)。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 女性未婚者取其尿道口及陰道口周圍膿性分泌物，女性已婚患者在拭凈宮頸表面分泌物后，用無菌拭子插入宮頸管1~2cm，轉動2周取出拭子。男性患者拭凈莖頭后將拭子插入尿道1.5cm取材。

1.2.2 檢測方法 取分泌物于500μL生理鹽水中，14000r/min離心5min，棄上清液，用50μL裂解液懸浮沉淀，100℃15min，14000r/min離心5min，取上清液2μL做PCR反應模板。取出已分裝有PCR混合物的離心管。室溫融化，離心數秒。在PE480型微電腦擴增儀上進行擴增，條件為94℃45s，55℃45s，72℃45s，共35個循環。取10~15μL擴增產物于2%的瓊脂糖凝膠上進行電泳.以溴化乙錠染色在紫外線燈下觀察到400bp的DNA片段即為淋病奈瑟菌(NG)PCR陽性。每批標本擴增同時行陽性對照(2μL陽性模板)和陰性對照(2μL雙蒸水)。

2 結果

2.1 泌尿外科就診的男性受檢者656人。年齡最小18歲，最大60歲，PCR-NG陽性者246人，陽性檢出率為37.5%；各年齡組陽性率見表1。

2.2 婦科門診就診女性受檢者912例，年齡最小21歲，最大56歲，PCR-NG陽性312例，陽性檢出率為34.21%；各年齡組陽性率見表2。

2.3 不同類別從業人員受檢者PCR結果顯示：從事美容美體、發廊、會所、賓館、足浴、酒店、按摩房等休閑服務人員PCR-NG檢出率最高達47.36%，各職業人員檢出率見表3。

3 討論

3.1 檢測結果分析 本組1568例.PCR-NG陽性558例，陽性率為35.59%，其中男性656例，PCR-NG陽性246例，陽性率為37.5%，女性912例。PCR-NG陽性312例，陽性率為34.21%；總陽性率男性與女性陽性率之間比較無顯著性差異(P＞0.05)。職業類別人員分析：休閑服務業檢出率最高，為47.36%。其次為進城務工人員，檢出率為30.94%，流動人口檢出率為22.47%，個體企業人員為24.32%，公職人員為15.63%。本組檢出率最高與最低組比較，有非常明顯性差異(P＜0.01)表明休閑服務人員等是淋病PCR-NG檢出率較高的人群。

。本資料符合文獻報道。

3.2 PCR技術的價值 淋病由淋病奈瑟菌引起，其特點是侵襲黏膜.以生殖泌尿系統黏膜的柱狀上皮與移行上皮為主。其臨床表現相同。因此，單憑癥狀與臨床表現診斷淋病有一定困難嘲。PCR是一種體外擴增特異DNA片段的檢驗技術，可在短時間內使極微量的核酸片段擴增到數百萬個特異DNA序列拷貝。本研究采用PCR技術方法，直接檢測標本中淋球菌DNA，不需作分離培養，具有特異性強，靈敏度高，簡便快速等優點。可為臨床治療提供及時、準確、客觀、可靠的診治依據，具有科學有效的實用價值。

(閏鑫，聚合酶鏈反應技術診斷淋病的體會[J]實驗與檢驗醫學2012年6月第30卷第3期：311-312)

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