液氮淺低溫冷凍對皮膚色素及黑色素細胞影響

　　我們用液氮淺低溫冷凍療法治療斑禿取得了滿意的療效 .其有效率及痊愈率高、見效快、無副作用、方法簡便等優點，優于斑禿的一般療法，而且用該法治療后的新生毛發為粗而黑的正常毛發，而非其它療法后長出的細、軟、色淡或白色的毳毛樣發。我們進一步通過實驗研究，證實了比與淺低溫冷凍刺激了黑色素細胞，使之數目增加和功能有增強有關。

　　目的：研究液氮淺低溫冷凍對皮膚色素及黑色素的影響。方法：用液氮淺低溫冷凍機直接接觸法和棉簽法冷凍。結果：顯示冷凍后家兔毛被黑而粗，與對照組不同，后者為細、軟、色淡的毳毛樣毛被，并且所有實驗區伴有色素沉著，組織學顯示表皮黑色素顆粒和黑色素細胞數目顯著增多（P<0.001）。結論：淺低溫冷凍可增加黑色素細胞數目和促進黑色素的合成，此為臨床上用該法治療斑禿和白癜風提供了理論依據。

　　1 材料與方法

　　1.1 動物 體重1.5~2kg的健康成年黑色家兔24只，雌雄不限。

　　1.2 方法 實驗組以接觸法和棉簽法隨機分為兩組進行了冷凍，每組各10只，每只兔臀部剪毛后不冷凍作自身對照，另設對照組4只，背部剪毛后不予冷凍。

　　1.2.1 接觸法冷凍組 剪去兔背部毛被，以2%龍膽紫標記出直徑2cm大小的實驗區3處，用江蘇泰興電工器械廠生產的液氮冷凍治療機接以直徑1cm大小的冷凍頭，以直接接觸法冷凍已標記好的實驗區，從冷凍頭接觸兔皮開始計時，冷凍15s,凍融2次為1個周期。

　　1.2.2 棉簽法冷凍組 同樣剪毛后以棉簽蘸液氮涂擦實驗區，使局部結一層簿霜（約1s），自然融化后再涂擦2次為一周期。對照組及自身對照區均剪毛后不予冷凍。

　　1.3 觀察項目 （1）于實驗組冷凍后每日肉眼觀察各組局部皮膚及毛被色澤變化。（2）組織學檢查：于冷凍后2h、24h、48h、7d、14d分別切除實驗組與對照組皮膚，以10%甲醛固定、石蠟包埋切片，HE染色作光鏡檢查。隨機觀察每組幾個視野的表皮黑色素顆粒的密度并計數黑色素細胞數目，做統計學處理。

　　2 結果

　　2.1 局部皮膚及毛被色素變化

　　2.1.1 接觸法組 冷凍14d后，有2只兔在冷凍邊緣區長出數根粗而黑的毛，長約0.2cm,28d后，各冷凍區邊緣均布滿一圈又粗又黑的毛，長約0.4cm.50d左右冷凍區中央開始長出灰白色毛。80d左右冷凍區毛長至1cm以上，局部皮膚均出現深黑色色素沉著，冷凍區中央灰白色毛邊變為黑色，114d后皮膚色素沉著消退，毛被長至正常長度。

　　2.1.2 棉簽法組 冷凍后18d,一只兔在冷凍區散在地長出0.3cm之粗黑毛，23d左右，所有冷凍區均彌漫性地長出粗黑毛被，長約0.4cm,28d左右，局部皮膚出現色素沉著，49d以后，皮膚色素沉著漸消退，90d左右實驗區毛被長度超過正常毛被長度。對照組及自身對照區：在實驗組冷凍107d和114d左右始見有少量細軟灰黑色兔毛長出，長度0.2~0.3cm,速度緩慢，共有3處對照區皮膚出現小片狀色素沉著。

　　2.2 組織學改變 冷凍2h后，皮膚水腫，真皮淺層毛細血管擴張、充血，并有嗜酸性細胞、淋巴細胞及少量漿細胞浸潤，24h達高峰，48h后上述反應減輕。1周后組織水腫及細胞浸潤消退，表皮及毛囊上皮呈增生狀態，基底層色素顆粒及黑色素細胞數目增多，真皮毛細血管數目增多。皮膚色素沉著區活檢：基底層及部分棘層下部色素顆粒呈彌漫性分布，黑色素細胞數目顯著增多，遍及整個色素沉著區，與對照組形成鮮明對比P<0.001）。黑色素細胞形態與對照組差異無顯著性。

　　3 討論

　　黑色素細胞對冷凍較為敏感，冷凍-30℃以下，黑色素細胞即被破壞，故在人類，深低溫冷凍后形成的色素減退斑很少有色素恢復現象。Burge等研究了豚鼠皮膚深度冷凍后的色素變化和黑色素細胞的分布，發現冷凍1個月后，所有冷凍區中央出現了色素減退，周圍伴有一圈色素沉著區，光鏡下見色素減退區缺乏黑色素細胞，而色素沉著區，黑色素細胞數目顯著增加（P<0.001）。冷凍2個月后，色素漸從冷凍邊緣的色素沉著區擴散至中央的色素減退區。3個月后，所有色素減退區出現了彌漫性色素沉著，光鏡下見黑色素細胞遍及整個彌漫性色素沉著區。電鏡下見這些黑色素細胞與鄰近正常皮膚的黑素細胞之超微結構無明顯區別。因而筆者認為：輕微的表皮損傷可增加黑色素細胞之合成和使以前多已陰性的黑色素細胞合成黑色素，而遷移至冷凍損害邊緣的黑色素細胞能耐受次致死冷凍劑量而合成大量的黑色素。

　　我們的實驗結果與上述報道類似。不管是臨床上用淺低溫冷凍療法治療斑禿時，還是動物實驗中，其新生毛發均粗而黑，而非同其它療法后長出的細軟、色淡或白色的毳毛樣發（本組接觸法組因冷凍劑量大于棉簽法，故中央區新生毛發細軟、色淡以后 才變為正常色澤）。同時，實驗組在毛被生長過程 中，皮膚也伴隨著出現色素沉著，持續20~30d天方消退，組織學顯示冷凍組色素顆粒及黑色素細胞數目顯著增多（P<0.001）。 Tosti等發現，斑禿的毛囊受累、黑色素細胞也從毛球消失，故開始長出的毛發往往是白色或比原色澤為淡，這說明斑禿的黑色素細胞也是受損的。本試驗進一步證明：淺低溫冷凍能刺激黑色素細胞使之數目增加和功能增強，因而合成大量的黑色素。此為臨床上用該法治療斑禿及白癜風提供了理論依據。

　　參考來源：《液氮淺低溫冷凍對皮膚色素及黑色素細胞影響的實驗研究》楊 磊，聶意飛，廖端宇，張建明，李鴻業，《中華現代皮膚科學雜志》2004年9月第1卷第1期

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