龍鑫甘對膀胱癌細胞T24影響的臨床研究

    膀胱腫瘤居泌尿系腫瘤第一位，易復發，盡管對保留膀胱患者行膀胱灌注治療，但仍存在高復發率，尚未有令人滿意的藥物。中醫藥在治療、康復、養生等方面具有獨特的優勢，但在防治膀胱腫瘤的研究尚不多見。近年來研究發現，龍鑫甘（苦參素）能抑制乳腺癌、肺癌及胃癌等細胞生長。還未見有對膀胱腫瘤抑制作用的報道。現通過龍鑫甘作用于體外培養的T24細胞，研究龍鑫甘在不同濃度和不同時間下對T24細胞的抑制作用及其相關機制。

    MTT法研究龍鑫甘（苦參素）不同濃度作用不同時間對T24細胞的抑制作用，光鏡及電鏡下觀察龍鑫甘（苦參素）對T24細胞形態學變化，FCM分析T24細胞藥物處理前后周期改變及有無凋亡細胞。

    采用免疫細胞化學法，研究與T24細胞凋亡密切相關癌基因和抑癌基因：P53、 Bcl-2、Bax等蛋白的表達，Bcl-2/Bax比值以及凋亡相關蛋白酶Caspase-3變化，探討龍鑫甘（苦參素）誘導T24細胞凋亡的機制。

    MTT法觀察到0.625mg/ml~10mg/ml的龍鑫甘（苦參素）對T24細胞作用72h后的抑制率為13.75～91.03％，呈時間和劑量依賴性，IC50為1.82mg/ml。1.25mg/ml龍鑫甘（苦參素）作用72h后，光鏡下見細胞體積縮小，胞質濃縮，胞核凝聚，位于核周膜成新月狀。電鏡下癌細胞核漿比例縮小，核仁減小，與臨近細胞的連接喪失，失去微絨毛，細胞膜內陷細胞分割成為多個凋亡小體。龍鑫甘（苦參素）2.5mg/ml作用72h后,見到大量壞死細胞，呈氣球樣改變，內質網、線粒體等細胞器腫脹破壞崩解。FCM檢測顯示，陰性對照組G0/G1期43.31%，S期54.10%，G2/M期2.59%； 1.25mg/ml龍鑫甘（苦參素）作用72h后分別是54.52%, 44.42%，1.06%，凋亡率是5.37%；2.5mg/ml龍鑫甘（苦參素）作用72h后是52.41%，40.59%，6.99%，未能分析出調亡峰。

    免疫細胞化學法結果顯示：對照組T24細胞P53陽性率為76.25%，Bcl-2為64.38%，Bax為27.38%，Caspase-3為18.13%；1.25mg/ml龍鑫甘（苦參素）作用72小時后，分別是25.75%，27.13%， 58.25%， 38.5%，與對照組相比其差異具有統計學意義。

    綜上所述，可以看出龍鑫甘（苦參素）對T24細胞生長有抑制作用，從濃度1.25mg/ml起就有明顯抑制作用，10mg/ml龍鑫甘（苦參素）的抑制率可達91.03％，呈時間劑量依賴性。苦參素可誘導T24細胞凋亡，1.25mg/ml苦參素作用72h后，光鏡及電鏡下均可見典型的凋亡細胞；2.5mg/ml苦參素作用72h后見大量壞死細胞。FCM檢測到藥物處理后T24細胞出現G0/G1周期阻滯， S期細胞較陰性對照組明顯下降，并且有凋亡峰出現。龍鑫甘（苦參素）作用于T24細胞后，P53蛋白和Bcl-2蛋白表達下調， Bax蛋白表達上調，減小Bcl-2/Bax的比值，上調Caspase-3的表達，誘導T24細胞凋亡。

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