特應性皮炎患者外周血輔助性T細胞22的表達及意義

【摘要】目的 檢測特應性皮炎(AD)患者外周血輔助性T細胞22(Th22)的表達，探討其在AD發(fā)病機制中的作用。方法 以濕疹面積及嚴重度指數(shù)(EASI)評分評估患者病情，采用流式細胞術檢測46例AD患者和28例健康對照者外周血Th22(IL-22)細胞，ELISA法檢測血清中IL-22、IFN-γ、IL-4水平。結果 AD患者外周血Th22細胞(2.35±0.64)%，明顯高于對照組的(0.94±0.43)%(P＜0.01)；Th22細胞與血清中IL-22呈正相關(r=0.48，P＜0.05)，而與IFN-γ、IL-4無相關(r=-0.105，P＞0.05；r=-0.267，P＞0.05)，Th22細胞與疾病的EASI評分呈正相關(r=0.53，P＜0.05)。結論 Th22細胞有可能作為監(jiān)測AD嚴重程度或病情波動的指標。

【關鍵詞】特應性皮炎；外周血；輔助性T細胞22

 

特應性皮炎亦稱異位性皮炎，是一種與遺傳有關的特發(fā)性炎癥性皮膚病，病因尚不清楚，有學者認為Th22細胞在AD的發(fā)病機制中起到一定的作用。本實驗通過檢測AD外周血Th22細胞的數(shù)量，分析其與IL-22、IFN-γ、IL-4及疾病EASI評分的相關性，進而探討其在AD發(fā)病機制中的作用與臨床意義。

 

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年2月至2012年1月我院門診AD患者46例，均符合1980年Hanifin和Rajka制定的診斷標準，停用抗組胺藥一周以上，半年內未使用過糖皮質激素及免疫抑制劑。其中男26例，女20例；年齡2~48歲，平均(21.1±6.36)歲；3例伴有過敏性鼻炎病史，2例伴有哮喘病史。另選擇健康志愿者28例作為對照，其中男16例，女12例；年齡3~46歲，平均(23.56±4.36)歲。所有檢查均征得患者和志愿者的知情同意，并填寫知情同意書。

 

1.2 儀器與試劑 流式細胞儀器為Beckman Coulter EP-ICS XL產(chǎn)品；單克隆熒光直標抗體鼠抗人IL-22A-FITC，CD4-Pecy5為美國Biolegend公司產(chǎn)品及相應的同型對照FITC標記鼠IgG1、Pecy5標記鼠IgG1；固定劑及破膜劑(FIX&PERM Caltag公司)；RPMI1640、PMA、Ionomycin和Monensin(Sigma公司)；美國產(chǎn)BB5060型CO₂細胞培養(yǎng)箱；ELISA試劑盒購自杭州聯(lián)科生物有限公司。

 

1.3 方法

1.3.1 Th22的檢測 采用流式細胞術，無菌抽取靜脈血3ml，枸櫞酸鈉充分抗凝。按一定的比例進行全血細胞刺激培養(yǎng)4h(全血細胞刺激培養(yǎng)：每管加入0.5ml無血清的RPMI-1640培養(yǎng)液、0.5ml枸櫞酸鈉抗凝的全血和終濃度為25ng/ml的PMA、1μg/ml的Ionomycin、20ng/ml的Monensin，混勻后置于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h)。培養(yǎng)后的全血細胞經(jīng)PBS洗滌后，分成2管，分別加10 μl抗CD4+抗體進行表面染色，混勻后室溫暗處放置30 min；加固定劑50μl，室溫放置15 min加入4ml PBS洗滌，1500r/min，離心10min，去上清液；加通透劑30μl，2管分別加入抗IL-22抗體及FITC抗體同種型對照，混勻后室溫暗處放置15 min，用相配套溶血素溶血，洗滌1次，去上清液，加PBS 500μl配成1.0×10⁷/L的細胞懸液，待上機檢測。

 

1.3.2 血清IL-22、IFN-γ、IL-4的檢測 采用ELISA法，用促凝管采空腹靜脈血2ml，3000rpm，10min分離上清液，取足夠上清液于離心管中，70℃保存，備用，避免反復凍融，操作步驟按照試劑盒說明進行。

 

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，采用均數(shù)±標準差(x(-)±s)表示，進行獨立樣本t檢驗，相關性分析采用Spearman相關分析，P＜0.05表示差異有顯著性。

 

2 結果

2.1 AD患者外周血Th22細胞為(2.35±0.64)%，明顯高于對照組的(0.94±0.43)%，差異有極顯著性(P＜0.01)。

 

2.2 對46例AD患者血清中細胞因子進行檢測，結果顯示：IL-22的濃度為(8.76±9.36)pg/ml；IFN-γ的濃度為(33.69±10.28)pg/ml；IL-4的濃度為(18.76±11.53)pg/ml。分別將其與Th22細胞作相關性分析，結果顯示：IL-22與Th22細胞呈正相關(r=0.48，P＜0.05)，IFN-γ、IL-4與Th22細胞均無相關(r=-0.105，P＞0.05；r=-0.267，P＞0.05)。

 

2.3 按照濕疹面積及嚴重度指數(shù)(EASI)評分法對AD患者病情嚴重程度進行評分，46例AD患者評分為(23.86±18.35)(范圍：0~62.6)，Th22細胞與EASI評分呈正相關(r=0.53，P＜0.05)。

 

3 討論

特應性皮炎是皮膚科常見病、多發(fā)病，正成為公共健康的主要問題之一。目前，研究特應性皮炎與Th細胞亞群的文獻很多，但結論各不相同，隨著對特應性皮炎及Th細胞亞群研究的逐漸深入，Th細胞亞群及其細胞因子在特應性皮炎中的作用得到更廣泛的關注。傳統(tǒng)觀點認為AD的發(fā)病與Th1/Th2的失衡有關。

 

最近幾年，有報道稱，在異位皮炎病人的病灶組織中存在一群產(chǎn)生IL-22但不產(chǎn)生IL-17、IFN-γ和IL-4的細胞。這種新型的T細胞亞群，被定義為Th22細胞，其既不同于傳統(tǒng)Thl和Th2細胞，也不同于近年發(fā)現(xiàn)的Th17細胞，參與皮膚的自穩(wěn)調節(jié)和病理狀態(tài)，由此對AD的發(fā)病機制提出了新的挑戰(zhàn)。本研究通過檢測發(fā)現(xiàn)，AD患者外周血Th22較對照組明顯升高，且與疾病嚴重程度呈正相關，進一步證實Th22細胞在AD發(fā)病機制中的作用。

 

Th22細胞的表型為CCR6+CCR4+CCR10+，關鍵轉錄因子是芳香烴受體(AHR)，主要分泌IL-22，還可分泌IL-l0、IL-13、IL-26、腫瘤壞死因子(TNF)-α等細胞因子。其功能主要是通過IL-22來實現(xiàn)的。體外實驗研究發(fā)現(xiàn)，IL-23或IL-6均可誘導刺激IL-22的表達。在漿細胞樣樹突細胞刺激下，IL-6和TNF-α可以促進CD4+T初始細胞向Th22型細胞的分化。

 

IL-22最早由Dumoutier等命名為IL-10相關的T細胞衍生可誘導因子，由IL-9誘導小鼠T淋巴細胞瘤產(chǎn)生，其22%的氨基酸序列與IL-10同源。在人類體細胞中檢測出該因子，因而命名為IL-22。IL-22與其受體結合導致Janus激酶(JAK)和Stat活化，尤其是Stat3傳導途徑的活化。

 

有研究證實Th22與特應性皮炎發(fā)生發(fā)展密切相關，其分泌的IL-22表達升高，且IL-22CD8+T細胞數(shù)與異位皮炎的嚴重程度相關。本研究結果顯示，AD患者外周血Th22較對照組明顯升高，與IL-22呈正相關，且與疾病嚴重程度呈正相關。我們推測，在AD的發(fā)病過程中，Th2型細胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13依次刺激嗜酸粒細胞增加，使其釋放出的IL-6促進CD4+T初始細胞向Th22型細胞分化，而Th22型細胞主要分泌IL-22，因此IL-22的表達增強。IL-22與受體結合后能激活傳導通路中的信號轉導因子，通過與靶基因DAN結合區(qū)域相結合而實現(xiàn)相應的生物學效應，參與AD的發(fā)病。本研究結果表明，AD患者外周血Th22細胞與IFN-γ、IL-4無相關，提示屬于Th1細胞因子的IFN-γ和Th2細胞因子的IL-4與Th22細胞的分化無關，是獨立于Th1和Th2的細胞亞群。

 

Th22細胞作為一個獨立的新型輔助性T細胞具有特殊的表型和生物學效應。隨著研究的深入，針對細胞因子的靶向治療成為可能，為特應性皮炎的治療提供理論依據(jù)。至于Th22究竟以什么方式參與特應性皮炎，其所分泌的細胞因子在整個細胞因子網(wǎng)絡中處于什么環(huán)節(jié)，尚需要進一步的研究。

 

(郭曉蘭，李秀娟，特應性皮炎患者外周血輔助性T細胞22的表達及意義[J]國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報2012年第18卷第l4期：2025-2026)

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