蘇肽生注射用鼠神經(jīng)生長因子對周圍神經(jīng)損傷保護作用的研究

    蘇肽生通用名：注射用鼠神經(jīng)生長因子。神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)是神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生物活性分子之一，其研究和應(yīng)用是當(dāng)今生物界一熱門課題�，F(xiàn)已證實NGF是參與損傷神經(jīng)再生和功能修復(fù)的重要因素，是兼有神經(jīng)營養(yǎng)因子與促神經(jīng)突起生長因子雙重作用的蛋白質(zhì)。大量實驗資料表明，NGF用于臨床有廣闊的前景。為進一步探討NGF對周圍神經(jīng)損傷的影響，本文觀察了NGF對化學(xué)性及機械性外周神經(jīng)損傷的影響，并用新生大鼠背根神經(jīng)節(jié)體外無血清培養(yǎng)方法，觀察NGF對感覺神經(jīng)元的神經(jīng)營養(yǎng)作用。

    材料和方法 ：藥品與試劑 NGF由四川抗菌素工業(yè)研究所和浙江永寧制藥廠共同提供，是采用Mobley法從小鼠頜下腺分離純化得到的2.5s NGF，其分子量為14000，以生理鹽水溶解；6-羥多巴胺(6-OHDA)為Sig ma產(chǎn)品，以0.1%維生素C溶液溶解、臨用現(xiàn)配；去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)、辣根過氧化物酶(HRP)，3，3''-二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽(DAB)、多聚左旋賴氨酸均為Sigma產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)基為Gibco產(chǎn)品。

    結(jié)果 ：NGF是神經(jīng)系統(tǒng)維持正常發(fā)育和功能的必要因素，周圍神經(jīng)和靶組織中NGF的含量與該神經(jīng)(交感神經(jīng)和感覺神經(jīng))支配靶組織的密度相一致。周圍神經(jīng)損傷時，其神經(jīng)元將發(fā)生一系列的病理改變，包括死亡。小鼠頜下腺的交感神經(jīng)支配非常發(fā)達，為觀察外源性NGF對其效應(yīng)神經(jīng)元損傷時具有的保護效應(yīng)，尤其是損傷后短期集中給予NGF的影響。本文采用ip6-OHDA10mg.kg-1特異地損毀成年昆明雌性小鼠交感神經(jīng)末稍，造成化學(xué)性去交感。用高效液相色譜電化學(xué)檢測器測定小鼠頜小腺NE的含量。結(jié)果顯示，損傷后頜下腺NE含量顯著下降，外源性NGF顯著提高交感遞質(zhì)NE在頜下腺的殘留水平，但在實驗中發(fā)現(xiàn)，NGF不能增加正常小鼠頜下腺NE水平，對劑量6-OHDA(15mg.kg-1)所引起的嚴(yán)重損傷，NGF提高NE殘留率不明顯，這表明在6-OHDA劑量小，交感神經(jīng)末梢損傷輕時，外源性NGF的神經(jīng)保護作用更明顯。這可能是NGF阻止了靶區(qū)內(nèi)部分尚完好的神經(jīng)纖維遭受繼發(fā)性損傷，進一步又促進這些纖維側(cè)芽的生成。

    研究證實NGF對周圍神經(jīng)再生有密切關(guān)系，并起著重要作用。在周圍神經(jīng)切斷處局部給予外源性NGF，經(jīng)4-6h，可逆行運輸?shù)奖掣��?jīng)濟節(jié)胞體，通過影響背根神經(jīng)節(jié)細胞的新陳代謝，并將這一影響轉(zhuǎn)換成別的信息傳到脊髓聯(lián)絡(luò)神經(jīng)元，引起脊髓神經(jīng)生理和功能上的變化。成年鼠坐骨神經(jīng)切斷處局部給予外源性蘇肽生，可防止同側(cè)背根神經(jīng)節(jié)細胞的死亡。本實驗結(jié)果表明，在損傷側(cè)局部給予外源性蘇肽生，能顯著增加同側(cè)頸7、胸1背根神經(jīng)節(jié)HRP標(biāo)記的細胞數(shù)，表現(xiàn)出促神經(jīng)修復(fù)的作用，而對側(cè)受損的神經(jīng)無影響。有資料提示，經(jīng)全身途徑給予蘇肽生，沒有顯示出蘇肽生的促神經(jīng)再生作用，故實驗采用周圍神經(jīng)損傷處局部給予蘇肽生，能為神經(jīng)修復(fù)早期提供信息。

    有關(guān)蘇肽生的作用機制目前認為，蘇肽生效應(yīng)都是由其受體介導(dǎo)的。蘇肽生先與效應(yīng)細胞的膜受體結(jié)合，此復(fù)合體再沿軸漿轉(zhuǎn)運經(jīng)軸突至胞核，于是引起一系列反應(yīng)，但是完全闡明蘇肽生保護效應(yīng)神經(jīng)元和促進神經(jīng)再生的機理仍有困難。實驗研究表明蘇肽生作為藥物用于治療神經(jīng)損傷，促進功能修復(fù)充滿著希望。

TAG：蘇肽生