通絡生骨膠囊對兔骨折后X線及組織形態學的影響

　　為驗證通絡生骨膠囊促進骨折愈合的作用。臨床試驗結果顯示，通絡生骨膠囊可促進骨折斷端血腫機化，軟骨細胞增生明顯，軟骨骨痂出現早，骨化提前，早期形成大量新的小梁骨（編織骨），骨折局部密度增高，斷端塑形改造良好，骨髓腔再通時間短。表明通絡生骨膠囊可以縮短骨折愈合過程和提高骨折愈合質量。

　　骨折是骨科臨床中最常見的病種，運用中西醫結合的方法治療骨折可以提高骨愈合率，有效減少骨科并發癥，已越來越成為廣大臨床醫師的共識。導師袁浩教授致力于中西醫結合治療骨科疾患50余年，尤其對治療股骨頭壞死的研究有獨特見解，研制生產的通絡生骨膠囊經過30年的臨床觀察及大量實驗驗證，證明對股骨頭壞死疾病的治療有明顯療效。同時，在臨床應用過程中還發現有一部分存在骨嚴重缺損和骨不易愈合的骨折病例在使用本藥后，骨缺損得到了不同程度的修復，骨折也都獲得了早期愈合。為了進一步驗證本藥在促進骨折愈合方面的作用，我們進行了如下的實驗研究。

　　1　試驗材料

　　1. 1　藥物　①通絡生骨膠囊：由浙江海正藥業股份有限公司生產，批號040401，規格為每粒0.5g，成人用量為每次4粒，每天3次；②傷科接骨片：由大連美羅中藥廠有限公司生產，批號200402119；規格為每片0.35g，成人用量為每次4片，每天3次；③注射用青霉素鈉：由華北制藥股份有限公司提供；④速眠新Ⅱ注射液：由長春軍需大學獸醫研究所提供。

　　1. 2　儀器　①飛利浦MD3多功能數字減影血管造影機，荷蘭飛利浦公司生產，廣州中醫藥大學第一附屬醫院提供；②LeicaSM2000R型平推切片機，德國萊卡儀器有限公司生產，廣州中醫藥大學科技園提供；③光學顯微鏡及拍照系統，德國萊卡儀器有限公司生產，由廣州中醫藥大學針灸實驗室提供。

　　1. 3　動物　新西蘭大白兔，普通級，10～12月齡，體重2.0～2.5kg，雌雄各半，共120只，由廣州中醫大學實驗動物中心提供，實驗動物質量合格證號SCXK（粵）200320001，動物飼料廣州中醫藥大學實驗動物中心提供標準飼料。

　　2　試驗方法

　　2. 1　造模方法　選用10～12月齡2.0～2.5kg健康新西蘭白兔120只，雌雄各半，隨機分為5組，每組24只。適應性飼養1周后開始造模。按0.2ml•kg-1體重的速眠新給藥進行麻醉，麻醉后在無菌條件下用骨鋸造成兔雙側橈骨骨折模型，斷端相距約1mm，縫合皮膚。隨即每只動物肌肉注射青霉素鈉20萬U，放入籠中自然蘇醒。以后每天2次，每次每只20萬U肌肉注射青霉素鈉以預防感染，連續注射4天。術后未發生1例感染，傷口均一期愈合。

　　2. 2 給藥方法　造模后，進行相應的藥物治療，本試驗共設通絡生骨膠囊高、中、低劑量組，傷科接骨片組和模型組，見表1。按表1不同劑量設置，用蒸餾水配制相應濃度的藥物混懸液，通過灌胃給藥，每只兔給藥容積為10ml，模型組給予等量的蒸餾水，每天1次，連續灌胃4周。

　　2. 3　療效檢測　第1、2、3、4周，每組每次處死6只動物，每次處死動物均按號碼從大到小處死。分別作下述檢查。①X線評估：造模后第1、2、3、4周，每組分別處死6只兔，取雙側前肢橈骨，將右側橈骨剔除軟組織后在飛利浦MD3多功能數字減影血管造影機下拍攝X線片，進行療效評估，左側橈骨留作其他試驗檢測用。②組織學觀察：造模后第1、2、3、4周，先完成X線拍攝后，將右側橈骨標本骨折端骨組織用10%中性甲醛固定24小時，5%的甲醛甲酸脫鈣8天，石蠟包埋，切片后HE染色。

　　2. 4　數據處理及統計學分析所有計量資料均以均數±標準差.x±s表示。采用SPSS11.0統計軟件包進行方差分析（ANOVA）。顯著性檢驗水準取a=0.05，P<0.05則為有顯著性差異。

　　3　結　果

　　3. 1　X線讀片結果　第1周：骨折線清晰可見，但通絡生骨膠囊高、中、低劑量組局部的血腫吸收較好，比傷科接骨片和模型組血腫面積小。第2周：骨折斷端已有少量纖維連接，骨折線模糊，各組之間無明顯差別。第3周：通絡生骨膠囊高、中、低劑量組骨皮質連續，骨折斷端呈梭形，完全看不到骨折線，而傷科接骨片組骨皮質部分連續，無明顯的骨折線，模型組骨折線模糊但仍可看到不連續的骨皮質。第4周：通絡生骨膠囊高、中、低劑量組的骨折已完全愈合，可見到明顯的外骨痂，骨折局部密度增高，高劑量組斷端的塑形改造較其他各組明顯提前。傷科接骨片組骨折斷端連續，有較多骨痂形成，髓腔部分再通，模型組有大量骨痂形成，斷端連續，但髓腔未通，整體愈合情況不如通絡生骨膠囊組和傷科接骨片組。

　　3. 2　X線片評分結果　第1、2周X線片無明顯區別，故只對第3、4周的X線結果進行評分比較。參考上海傷科研究所制定的骨折X線評分標準〔1〕計分（見表2）。按分數編秩進行組間秩和檢驗，結果如表3、4所示：第3周和第4周通絡生骨膠囊、傷科接骨片組與模型組比較均有顯著性差異（P<0.05）。通絡生骨膠囊高、中劑量組與傷科接骨片組比較有顯著性差異（P<0.05）。結果說明：①從X線評估，通絡生骨膠囊和傷科接骨片均能明顯促進骨折動物模型的骨折愈合。②通絡生骨膠囊對骨折愈合效果優于傷科接骨片。

　　3. 3　組織學觀察　第1周時模型組以纖維骨痂為主，血腫未消；傷科接骨片組以纖維骨痂為主，血腫未消；通絡生骨低劑量組以纖維骨痂為主，血腫未消；通絡生骨中劑量組以纖維骨痂為主，血腫未消；通絡生骨高劑量組以纖維骨痂為主，血腫吸收完全，部分見少量軟骨細胞生成。第2周時模型組血腫仍未完全吸收，見少量軟骨細胞生成；傷科接骨片組有少量軟骨細胞生成，有類骨質和纖維骨痂；通絡生骨低劑量組有軟骨細胞生長，出現軟骨成骨，內、外骨痂生長良好；通絡生骨中劑量組有軟骨細胞生長，出現軟骨成骨，內骨膜成骨，細胞呈立體狀，成骨活躍，骨痂生長良好；通絡生骨高劑量組有大量軟骨細胞生長，出現軟骨成骨，內骨膜成骨，細胞呈立體狀，成骨活躍，骨痂生長良好。第3周時模型組有軟骨內成骨，并少量類骨質和編織骨生成；傷科接骨片組有大量軟骨成骨，并有少量編織骨出現，斷端內、外骨痂未連；通絡生骨低劑量組軟骨內成骨與編織骨并存，內、外骨痂將骨折端連接；通絡生骨中劑量組大量軟骨成骨與編織骨并存，以成骨細胞為主，殘留部分前成骨細胞，內、外骨痂將骨折端連接；通絡生骨高劑量組已完成軟骨成骨。大量內、外骨痂將骨折端連接，以編織骨為主。第4周時模型組有軟骨細胞生成和軟骨內成骨，并見少量編織骨。斷端內、外骨痂相連，但骨髓腔未再通（附圖①）；傷科接骨片組有大量編織骨，軟骨細胞和編織骨共存，斷端內、外骨痂相連，骨髓腔部分再通（附圖②）；通絡生骨低劑量組軟骨內成骨基本完成，編織骨開始塑形，骨髓腔再通（附圖③）；通絡生骨中劑量組軟骨內成骨完成，可見大量成骨細胞，編織骨開始塑形，骨髓腔再通（附圖④）；通絡生骨高劑量組軟骨內成骨完成，可見大量成骨細胞，編織骨開始塑形，骨髓腔再通（附圖⑤） 。

　　以上組織學觀察骨折愈合情況與X線的評估基本相吻合，在相同時間點上比較：①通絡生骨膠囊和傷科接骨片對促進骨折愈合效果明顯優于未用藥的模型組。②兩種藥物相比較，在骨折愈合效果方面，通絡生骨膠囊要優于傷科接骨片。

　　4　討　論

　　骨折后良好的局部血液循環不僅可以提供所需的能源和營養物質，也為清除代謝廢物和壞死組織提供了必要條件。骨祖細胞具有多向分化的能力〔2〕，但受局部血液供應的影響，局部血液供應好，骨原細胞就分化為成骨細胞，反之分化為成軟骨細胞〔3〕�？梢�，成骨活動與斷端局部血液供應改善程度密切相關。以往的試驗證明通絡生骨膠囊具有較好的改善局部血液循環的能力。對骨折端的成骨細胞的募集起到了良好的促進作用。

　　最能直觀反映骨折愈合情況的指標是X線評估和組織學的觀察，從試驗結果來看，通絡生骨膠囊突出表現在斷端血腫機化快，軟骨細胞增生明顯，軟骨骨痂出現早，骨化提前，早期形成大量新的小梁骨（編織骨），骨折局部密度增高，斷端的塑形改造良好，骨髓腔再通。因此，通過本實驗可以說明通絡生骨膠囊有很好的促進骨折愈合的效果。

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