虎眼萬年青多糖對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用

【摘要】目的：依據(jù)虎眼萬年青組分中多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，篩選并優(yōu)化出60％醇濃度中性多糖活性組分S3，進(jìn)而研究其對(duì)體液免疫、細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子變化的影響，并從細(xì)胞和分子水平探討其作用的機(jī)理。方法：采用溶血素測(cè)定方法，測(cè)定 對(duì)小鼠脾細(xì)胞溶血素抗體的誘導(dǎo)作用；采用 H-TdR滲入法，測(cè)定S3對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖作用；采用 H-TdR后標(biāo)記法，測(cè)定S3對(duì)NK細(xì)胞細(xì)胞毒活性的影響；以ELISA法測(cè)定S3對(duì)小鼠脾細(xì)胞]L-2產(chǎn)生的影響；利用流式細(xì)胞術(shù)，檢測(cè)S3對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8、CD4／CI~陽性細(xì)胞百分率的影響；采用RT-FCR方法檢測(cè)L-2 mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：S3高、中劑量組能明顯增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞溶血素抗體的形成(P <O.05)；各劑量組均能明顯增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖能力(P<O.001)；各劑量組均能增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性并促進(jìn)]L-2的產(chǎn)生(P <O.001，P<O.01)；高、中劑量組cD8陽性細(xì)胞百分率明顯降低(P<O.001)，各劑量組均能顯著地提高CD4／CI~ 陽性細(xì)胞百分率(P<O.001)；高劑量組可明顯促進(jìn)脾細(xì)胞中細(xì)胞因子]L-2的mRNA表達(dá)，使表達(dá)量增加(P<O.05)。結(jié)論： 具有較強(qiáng)的增強(qiáng)機(jī)體多種免疫功能的作用，可利用開發(fā)為一種免疫增強(qiáng)藥物。

   近年來研究表明，廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜、植物和微生物細(xì)胞壁中的多糖類物質(zhì)能提高機(jī)體免疫功能，它不僅能促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞、M 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能，還能促進(jìn)細(xì)胞因子的生成。虎眼萬年青(Omithogahm eaudatum Ait，OCA)，俗稱珍珠草，為百合科、虎眼萬年青屬、有尾種多年生草本植物。從同屬虎眼萬年青中分離出的皂甙OSW-1對(duì)肺癌、乳腺癌有明顯的抗癌活性。體外抗P338淋巴細(xì)胞白血病活性結(jié)果表明，OSW-1是常見抗癌藥物喜樹堿、阿霉素 紫杉醇抗癌活性的10~100倍，并已由Deng等人首次合成。我們對(duì)虎眼萬年青不同成分進(jìn)行了體外抑瘤實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)總生物堿、總皂甙、總多糖對(duì)多種瘤株均顯示出不同程度的抑制作用。為了進(jìn)一步了解多糖抑瘤的作用機(jī)理，我們首先通過非特異性免疫功能試驗(yàn)，篩選出具有顯著提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的活性組分——60％醇濃度的中性多糖(S3)。本文進(jìn)一步對(duì)S3在小鼠體液免疫、細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了研究，同時(shí)，通過流式細(xì)胞術(shù)客觀地對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的變化進(jìn)行了檢測(cè)，并利用RT-PCR方法檢測(cè)了s3對(duì)脾細(xì)胞中細(xì)胞因子IL-2 mRNA表達(dá)水平的影響，從細(xì)胞和分子水平對(duì)其免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制進(jìn)行了研究。

實(shí)驗(yàn)經(jīng)過（略）

討論
    多糖類化合物主要是依賴于對(duì)免疫功能具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，從而表現(xiàn)出具有一定的抗衰老、抗病毒和抗腫瘤的作用。本項(xiàng)研究首次表明，60％醇濃度的虎眼萬年青中性多糖活性組分s3在促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬功能的非特異性免疫活性的基礎(chǔ)上，使巨噬細(xì)胞處理和傳遞抗原的能力增強(qiáng)，提高了抗體的水平。同時(shí)，還能增強(qiáng)小鼠T、B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、提高NK細(xì)胞細(xì)胞毒活性、促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素2(IL廣2)。IL-2是促進(jìn)細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)細(xì)胞的增殖與分化的重要調(diào)控因子。S3促進(jìn)T細(xì)胞的增殖反應(yīng)和11_,-2的分泌。有利于增強(qiáng)細(xì)胞毒T細(xì)胞和NK細(xì)胞的殺瘤效應(yīng)。T淋巴細(xì)胞亞群是構(gòu)成機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的重要因素。T淋巴細(xì)胞中輔助性T細(xì)胞CIM 和抑制性T細(xì)胞CD8兩個(gè)主要亞群，這兩類細(xì)胞相互變化、調(diào)整可以維持機(jī)體內(nèi)的免疫平衡。CIM具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的活性，輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，分泌細(xì)胞因子的作用，而CD8則有免疫抑制和細(xì)胞毒性的作用。S3能不同程度地使CD3、CIM、CD4／CD8升高，而使CD8下降，進(jìn)一步證實(shí)了S3對(duì)輔助性T細(xì)胞(Th)的增強(qiáng)作用及對(duì)抑制性T細(xì)胞(Ts)的降低作用，推測(cè)輔助性T細(xì)胞(1h)可能是其主要的原發(fā)刺激細(xì)胞。不同濃度S3能在一定程度上促進(jìn)IL-2的mRNA表達(dá)量，從基因水平上又進(jìn)一步證實(shí)了S3對(duì)IL-2生成的影響，推斷S3有促進(jìn)小鼠免疫功能的作用。

    本研究結(jié)果從非特異性免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫的角度，較全面地研究了s3對(duì)機(jī)體的免疫增強(qiáng)作用和對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，從分子及基因水平較全面地研究了s3的免疫增強(qiáng)作用，結(jié)合對(duì)該組分的分離鑒定工作，對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行更加深入的研究，不僅有助于進(jìn)一步說明s3的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制，而且對(duì)進(jìn)一步開發(fā)利用這一天然藥物也具有實(shí)驗(yàn)意義。

參考文獻(xiàn) （略）

石磊 譚巖 劉志強(qiáng) 劉淑瑩 (中國科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所新藥研究室，長(zhǎng)春130022)

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