遞法明片中氯化花青素的含量測定

    遞法明片為法國進口的植物藥制劑 ，其中含有歐洲越橘果提取物。歐洲越橘果即黑果越桔，主要分布于歐洲大部分地區，花青苷色素為其中的主要有效成分之一。花青苷具有促進視網膜上視紅素的再合成、增強人眼視力、改善視覺敏銳度、加快黑暗環境適應能力的功能，同時還可以防止毛細血管脆裂，改善循環系統機能 。越橘中花青苷種類較多，受對照品的限制。難以一一測定。研究表明，歐洲越桔果中的花青素糖苷衍生物主要以花青素一葡萄糖苷、花青素一半乳糖苷、花青素一阿拉伯糖苷等組成，測定時經稀鹽酸水解，以上糖苷均水解成花青素苷元的鹽酸鹽．再以氯化花青素作為對照品采用高效液相色譜法進行測定。本方法可作為遞法明片質量標準中的含量測定方法。 

    儀器與試藥：安捷倫1100型高效液相色譜儀；庚烷磺酸鈉，分析純；乙腈，HPLC級；所用其他試劑均為分析純。氯化花青素對照品：，批號94082512(標示純度為100％)；遞法明片，法國樂康一美的瀾制藥廠提供。 

    色譜條件：色譜柱：Alhima C．8柱(4．6 mm x 150 mm，5 m)，流動相：5 mmol•L 庚烷磺酸鈉溶液一乙腈一冰醋酸(73：27：1．5)；流速：1．0 mL•min～；柱溫：40 cc；檢測波長：530 nm。氯化花青素與相鄰雜質峰分離度大于1．5，理論塔板數按氯化花青素峰計算，應不低于2000。色譜圖見岡l。 

    溶液配制：對照品溶液精密稱取氯化花青素對照品適量，加鹽酸甲醇(3—10)溶液制成每1 mL含氯化花青素3．92 g的溶液，即得(避光)。供試品溶液取遞法明片的細粉0．5 g，精密稱定，置具塞離心管中，加正己烷15 mL，超聲處理3min，離心(4000 r•min )5 rain，小心傾去上清液，殘渣加正己烷15 mL，再同法操作3次，上清液棄去，殘渣揮干溶劑，加鹽酸甲醇(3—10)溶液15 mL，
超聲處理2 min使溶解，轉移至燒瓶中，用鹽酸甲醇(3—10)溶液15 mL分次洗滌容器，洗液一并轉入燒瓶，置90 水浴中回流1 h，立即冷卻，用鹽酸甲醇(3 —10)溶液定量轉移至50 mL棕色量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜(0．45 m)濾過，取續濾液，即得。 

    水解條件的考察：本研究采用正交實驗法，確定最佳酸水解條件。正交實驗方案設計采用L9(3 )正交表，以測得的氯化花青素含量作為指標。 

    試驗安排與試驗結果：分別取樣品細粉適量，照上述“3．2”項下的制備方法，按L9(3 )正交表試驗安排進行試驗，結果表明，對水解的主要影響因素為水解溫度和酸濃度，水解時間在選定范圍內，對結果影響不大。最佳水解條件為A3B3C3，從易操作性考慮，可將最佳條件定為A3B2C3。 

    氯化花青素的紫外可見光譜掃描圖譜顯示，存在276 nm和530 nm 2個最大吸收峰。由于在530 nm處測定時雜質干擾少，靈敏度高，故選擇530 lqm做為檢測波長。

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