泰特還原型谷胱甘肽抗白血病免疫佐劑作用實(shí)驗(yàn)研究

    人們很早就發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織內(nèi)及其周圍存在著大量T/NK細(xì)胞。與機(jī)體其他部位相比，腫瘤及其周圍組織中的T/NK細(xì)胞功能顯著降低。當(dāng)今，常以T/NK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，以IL-2為刺激劑作為腫瘤的過(guò)繼性免疫治療的手段，但對(duì)大部分病人療效不佳，其原因是腫瘤及其周圍組織內(nèi)也存在大量富含單核/巨噬細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞 (Mo)。 Mo 對(duì)荷瘤動(dòng)物淋巴細(xì)胞抗腫瘤作用有抑制效應(yīng)，這種抑制作用與Mo分泌反應(yīng)性氧代謝物（reactive oxygen metabolites，ROM）密切相關(guān)。二氫氯化物組胺（簡(jiǎn)稱組胺）可以逆轉(zhuǎn)ROM對(duì)T/NK抗腫瘤活性抑制作用，并且已做II期臨床試驗(yàn)，效果明顯，但其毒副作用大，臨床難于應(yīng)用。為了尋求高效低毒、便于臨床應(yīng)用的ROM逆轉(zhuǎn)劑，我們進(jìn)行了還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）在體外白血病細(xì)胞株培養(yǎng)體系中逆轉(zhuǎn)ROM、增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

    本研究探討還原型谷胱甘肽（GSH）逆轉(zhuǎn)反應(yīng)性氧代謝物（ROM）對(duì)NK細(xì)胞抗白血病效應(yīng)的抑制作用。

    在K562細(xì)胞、NK細(xì)胞的混合培養(yǎng)體系中分別加入富含單核細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞（Mo）和白細(xì)胞介素-2（IL-2），觀察ROM產(chǎn)量和K562細(xì)胞抑制率，然后分別加入GSH或二氫氯化物組胺（組胺），觀察ROM產(chǎn)量及K562細(xì)胞抑制率的變化。

    結(jié)果表明：加入IL-2后，ROM的產(chǎn)量從33.17±25.02 U/L增至223.59±59.41 U/L（P〈0.01），K562細(xì)胞抑制率從65.56%升至85.89% (P〈0.01)；在加入E/Mo=10/1、10/5、10/10 3種濃度的Mo后，ROM產(chǎn)量分別為389.79±43.83 U/L，456.74±42.77 U/L，601.42±21.92 U/L，K562細(xì)胞抑制率分別為82.36%，81.36%，48.09%，加入組胺或GSH后，E/Mo=10/2時(shí)，ROM產(chǎn)量從389.79±43.83 U/L，分別減至50.21±22.4 U/L和-3.58±9.49 U/L（P〈0.05），隨著GSH或組胺濃度的增加ROM產(chǎn)量逐減少，K562細(xì)胞抑制率從82.53%分別升至94.64%和96.39（P〈0.05），ROM產(chǎn)量與K562細(xì)胞抑制呈負(fù)相關(guān)（P〈0.05）；E/Mo=10/5或10/10時(shí)，高濃度的GSH或組胺可使ROM產(chǎn)量減少，但K562細(xì)胞抑制率提高不明顯（P〉0.05）。

    結(jié)論： 當(dāng)E/Mo=10/2時(shí)，GSH逆轉(zhuǎn)ROM強(qiáng)于組胺，提高NK細(xì)胞對(duì)K562的抑制率與組胺相似，但毒副作用輕微，GSH可能成為更理想的抗白血病的免疫佐劑。

    近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤/白血病細(xì)胞內(nèi)GSH/GST-S活性增高使腫瘤/白血病細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥性［10，11］，細(xì)胞內(nèi)的GSH增多，降低了化療效果。GSH是腫瘤/白血病多源耐藥的機(jī)制之一，我們得出了與文獻(xiàn)報(bào)道相反的結(jié)果的原因是：文獻(xiàn)報(bào)道GSH影響腫瘤/白血病療效指的是化療療效，因?yàn)樵S多化療藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)主要通過(guò)產(chǎn)生ROM而發(fā)揮作用，在ROM作用下線粒體還原型巰基轉(zhuǎn)化為氧化型二硫鍵，使線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mtPTP）開放，并進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［12］。因此，腫瘤/白血病細(xì)胞內(nèi)GSH增多，化療藥效降低；而在過(guò)繼性免疫治療中，GSH在腫瘤/白血病細(xì)胞外起到逆轉(zhuǎn)Mo產(chǎn)生的ROM，保護(hù)T/NK細(xì)胞免受ROM的損傷，充分發(fā)揮T/NK細(xì)胞的抗腫瘤作用。

    綜上所述，GSH具有逆轉(zhuǎn)ROM，提高NK對(duì)腫瘤/白血病細(xì)胞的抑制活性，毒副作用輕微，可能成為繼組胺之后更理想抗腫瘤/白血病免疫佐劑，值得進(jìn)一步研究。

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