羥基喜樹堿對胃癌細胞凋亡和細胞周期的影響

羅執芬，周云 ，劉明月
河南省人民醫院腫瘤科鄭州市450003

【摘要】 目的 探討羥基喜樹堿誘導胃癌細胞凋亡與細胞周期變化的關系。方法 用MTT法測定不同濃度的HCPT對胃癌細胞的生長抑制作用，用流式細胞儀測定一定濃度下不同作用時間細胞凋亡率和細胞周期的變化。結果 在3．125～5O．O g／ml濃度范圍內藥物對細胞的抑制率隨濃度的增加而增加；在相同濃度下，隨時間的延長細胞的凋亡率也逐漸增加，0、12、24、48h的凋亡率為2、8％ 、8．5％ 、10．2％ ，13．3％ ，在24h內S期細胞減少而Gn／G 細胞增多，第二個24h S期和G ／M的阻滯。結論 羥基喜樹堿可誘導胃癌細胞凋亡，其細胞凋亡與細胞周期分布有關。

關鍵詞 羥基喜樹堿；胃癌；細胞凋亡

    羥基喜樹堿是從我國特有的珙桐科植物喜樹中提取分離的天然生物堿，是一類廣譜的抗腫瘤藥，尤其在消化道腫瘤中的應用更多。近年來不少研究人員對羥基喜樹堿誘導不同腫瘤細胞的凋亡進行了大量的研究，細胞周期與凋亡有著密切的關系，為了探討羥基喜樹堿誘導的細胞凋亡與細胞周期的關系，為臨床設計更有效的治療方案提供實驗室依據，特設計此實驗。

1 材料與方法
1．1 材料 ①細胞株：人胃癌細胞BGC一823，河南省醫學研究所惠贈。② 實驗用藥物及試劑：羥基喜樹堿為湖北黃石飛云藥業產品；1640培養基為GIBCO公司產品；四甲基偶氮唑藍(MTY)為Sigma公司產品；標準胎牛血清為天津TBD血液研究所產品。

1．2 方法 ①MrlT法測定不同濃度羥基喜樹堿對細胞生長的抑制率。實驗藥物濃度按預實驗結果選五個濃度組即0、3．125、6．250、12．500、25．000、50．O00gg／ml。取對數生長期的細胞稀釋成4×10 ／ml，接種于96孔板，孵育24 h，按實驗設計加入實驗用藥，設實驗組和對照組，每組設4個復孔，放人培養箱中孵育48 h，用酶聯免疫檢測儀在570 am波長測每孔的吸光值(A)，按下列公式計算細胞生長抑制率：細胞生長抑制率(％)=(1一實驗組平均A值／對照組平均A值)×100％。每組重復5次。②細胞凋亡率和細胞周期檢測：本次取6．2501xg／ml組作流式細胞儀檢測，取4個時間段，即藥物作用后0、12、24、48 h進行檢測。按實驗設計處理細胞后，用70％ 的冷乙醇固定。采用碘化丙錠(PI)一步插人性DNA定量熒光染色法，檢測細胞周期和細胞凋亡率。

1．3 統計學方法 采用SPSS10．0統計軟件包處理。計量資料采用正態性檢驗，方差齊性檢驗，率的比較采用x 檢驗，以 =0．05為檢驗水準。

2 結果
    本實驗中HCPT單藥對BGC一823細胞有明顯的抑制生長的作用(見圖1)，其IC50為27．420~g／ml。相關性分析結果相關系數r為0．986。在流式細胞圖上可看到典型的亞二倍體凋亡峰(見圖2)，細胞周期分布顯示(見表1)，24h內S期細胞隨時間延長而減少，G。／G。期細胞漸增多，凋亡率也增加。與0h相比有統計學差異。

3 討論
    本組實驗表明羥基喜樹堿可以誘導胃癌BGC一823細胞的凋亡，其凋亡率有時問依賴性，其與細胞周期的變化有一定的相關性。在0h S期細胞所占的比率較大，加入藥物后的第一個24h，細胞中S期細胞的比率明顯下降，而G 期的細胞增多。在第二個24h S期細胞明顯增多，與0h比較有統計學意義。說明羥基喜樹堿誘導凋亡的機制可能與G．期和S期細胞的阻滯有關。許青在胃癌細胞，肺癌細胞上研究了羥基喜樹堿誘導凋亡的機制，揭示了誘導凋亡是其抗腫瘤作用的主要機制之一。Chai LP 用低劑量的HCPT作用于喉鱗癌細胞，表現出G ／M的阻滯，高劑量時表現出s期細胞的阻滯。而本試驗低劑量時表現出第一個24h G。阻滯和第二個24h的S和G ／M期的阻滯，這一特點與喜樹堿的半合成品伊立替康作用于結腸癌細胞HT一29對細胞周期的分布影響有相似之處 J。細胞凋亡存在著周期特異性，表現為不同的因素誘導的凋亡，發生在細胞的不同周期時段。進一步地研究HCPT對細胞周期的分布特點，將為不同藥物聯合使用提供實驗室依據。

參考文獻（略）

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